NADH對癲癇大鼠內嗅皮層神經元GABAA受體功能的作用.pdf

1、癲癇（epilepsy）是神經系統(tǒng)最常見的疾病之一，我國擁有約900萬癲癇患者。癲癇的治療首選是藥物治療，但同時約有1/3的患者對多種藥物治療效果不佳，成為難治性癲癇患者。難治性癲癇患者服用了能耐受的最大劑量，血藥濃度也達到有效范圍，但仍然無法控制癲癇發(fā)作，影響他們的日常生活。
　　癲癇發(fā)病機制不詳，但癲癇是由神經元異常放電所致的理論則得到廣泛認同。癲癇病人發(fā)作間期存在低葡萄糖代謝，而癲癇發(fā)作時正電子發(fā)射型計算機斷層顯像（PET）

2、圖像則表現(xiàn)為高代謝灶，提示癲癇的發(fā)作可能與糖代謝有關。GABAA受體功能異常被公認為癲癇發(fā)病的重要機制，其中α1亞基磷酸化對于維持GABAA受體功能有決定作用。GABAA受體α1亞基磷酸化依賴于，在Pi、NAD+、NADH、G-3-P存在條件下的GAPDH的糖酵解功能。因此糖代謝與癲癇的發(fā)病有著密切的聯(lián)系，特別是NADH可能會通過對GABAA受體功能的調控，影響癲癇的發(fā)作。鋰-匹魯卡品大鼠模型的致癇鼠可出現(xiàn)自發(fā)性癲癇發(fā)作(SRS)，腦電

3、圖表現(xiàn)與人類癲癇持續(xù)狀態(tài)十分類似，各種抗癲癇藥物均可對抗此癲癇發(fā)作，被認為是具有與人類顳葉癲癇相似特征的致癇鼠模型。在癲癇動物模型中，鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇動物模型是一種比較理想的公認的邊緣系統(tǒng)癲癇動物模型，我們給予大鼠腹腔注射鋰-匹魯卡品建立急性癲癇模型。
　　目的介紹建立氯化鋰-匹魯卡品致癇大鼠模型的方法,并且通過全細胞膜片鉗記錄,首先初步研究致癇大鼠內嗅皮層神經元GABAA受體功能。其次，NADH作為供氫體可參與體內多種代謝反

4、應，研究其會對GABAA受體功能有何影響，理清神經元能量代謝狀況對GABAA受體功能的影響。探討并豐富癲癇可能的發(fā)病機制，為臨床治療癲癇提供新的思路和方法。
　　方法實驗一：將30只Spraque-Dawley（SD）大鼠隨機分為癲癇模型組（20只）和生理鹽水對照組（10只）。癲癇模型組大鼠先后腹腔注射氯化鋰和匹羅卡品。大鼠癲癇發(fā)作癥狀采用Racine分級標準。點燃出現(xiàn)RacineⅣ級以上并存活者人組。對照組予以相同體積的生理鹽水

5、腹腔注射。將大鼠在麻醉下，迅速斷頭取腦，并用振動切片機切得6至8片內嗅皮層腦片。在電壓鉗Gapfree模式下記錄。全細胞記錄GABAA受體電流，每2min給藥10sec，持續(xù)12min。L
　　實驗二：將45只SD大鼠隨機分為NADH組（15只）、不干預組（15只）和對照組（15只）。所有大鼠先后腹腔注射氯化鋰和匹羅卡品。造模，取腦，制取腦片和電生理記錄同實驗一。各組都通過電極內液給藥。NADH組的內液加入NADH；對照組的普通內

6、液加入OkadaicAcid。
　　結果實驗一：可見癲癇組大鼠神經元細胞的GABAA受體電流隨時間的衰減非常明顯，而生理鹽水組大鼠神經元細胞的GABAA受體電流隨時間的衰減不明顯。在標準記錄條件下，我們將20組模型組數(shù)據和20組對照組數(shù)據列入了統(tǒng)計范圍進行比較。模型組的GABAA受體電流隨時間的衰減幅度較后者明顯加劇。時間是有統(tǒng)計學差異的(P<0.05)，分組的作用也是有差異的(P<0.001)，時間和分組還存在交互作用；固定時間

7、，對每個時間點上的處理組和對照組進行t檢驗，分組都有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。
　　實驗二：可見不干預組和對照組大鼠神經元細胞的GABAA受體電流隨時間的衰減非常明顯，而NADH組大鼠神經元細胞的GABAA受體電流隨時間的衰減相對不明顯。在標準記錄條件下，我們將20組NADH組數(shù)據、20組不干預組數(shù)據和20組對照組數(shù)據列入了統(tǒng)計范圍進行比較。NADH組的GABAA受體電流隨時間的衰減幅度較其它兩組明顯減輕。時間是有統(tǒng)計學差異的

8、(P<0.05)，分組的作用也是有差異的(P<0.001)，時間和分組還存在交互作用；固定時間，對每個時間點上的處理組和對照組進行t檢驗，分組都有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。
　　結論鋰-匹魯卡品癲癇模型的致癇鼠可出現(xiàn)自發(fā)性癲癇發(fā)作。其機制尚不十分清楚。本實驗中癲癇組大鼠GABAA受體電流衰減趨勢較正常組的增強，說明此模型可使GABAA受體功能受損。提示：GABAA受體功能受損可能是鋰-匹魯卡品致癇的電生理機制所在。