基質(zhì)硬度與轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1協(xié)同作用對肝細(xì)胞(LO2)表型的影響.pdf

1、目的：本文通過建立與人體正常肝組織、肝纖維化中后期及末期生理硬度相似的體外培養(yǎng)模型，探究轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1與基底硬度即理化協(xié)同作用對肝細(xì)胞表型改變的影響。
　　 方法：根據(jù)文獻(xiàn)資料，設(shè)計基底膜的硬度為3.6 kPa、10 kPa、30 kPa并建立體外培養(yǎng)模型。此三種硬度的基底膜分別對應(yīng)正常肝組織和肝纖維化中后期及肝纖維化末期肝組織的硬度。通過TGF-β1濃度梯度實驗確定TGF-β1影響肝細(xì)胞表型改變的濃度拐點。測出其濃度

2、拐點后，采用形態(tài)學(xué)觀察、計算機(jī)圖像處理、免疫熒光顯微觀測、Western Blotting及RT-PCR實驗技術(shù)研究肝細(xì)胞在不同硬度梯度的聚丙烯酰胺基底膜上及TGF-β1處理組中細(xì)胞形態(tài)變化特征、骨架裝配方式、E-鈣粘素表達(dá)、白蛋白和alpha-平滑肌動蛋白表達(dá)的差別；其中E-cadherin、白蛋白是上皮樣細(xì)胞表型的標(biāo)志性蛋白而α-平滑肌肌動蛋白是間充質(zhì)樣細(xì)胞表型的標(biāo)志性蛋白。
　　 結(jié)果：72小時后，對照組中肝細(xì)胞的鋪展面積

3、及長短經(jīng)之比隨著基質(zhì)硬度的增大而增大，細(xì)胞骨架也由皮質(zhì)下環(huán)逐漸變?yōu)閼?yīng)力纖維豐富且與細(xì)胞長軸平行的狀態(tài)。3.6 kPa TGF-β1處理組細(xì)胞骨架與其對照組相比沒有明顯的差異。但在10kPa、30 kPa基質(zhì)膜上TGF-β1的加入則進(jìn)一步促進(jìn)了骨架纖維的發(fā)育。WesternBlotting及RT-PCR的研究結(jié)果表明：無論是從蛋白水平還是DNA水平上來講E-cadherin、白蛋白的表達(dá)量隨著基質(zhì)硬度增加而逐漸減少，α-SMA的表達(dá)趨勢卻