實(shí)驗(yàn)性氟中毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥損傷機(jī)制中NF-B信號(hào)通路改變的作用.pdf

1、目的：觀察慢性氟中毒動(dòng)物腦組織及體外培養(yǎng)細(xì)胞模型中主要炎癥因子腫瘤壞死因子?（tumor necrosis factor?，TNF?）和白細(xì)胞介素-1?（interleukin-1?，IL-1?）的表達(dá)改變及細(xì)胞核因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中NF-κB、NF-κB抑制蛋白α（inhibitor of nuclear factorκBα，IκBα）的表達(dá)，探討其在慢性氟中毒炎性腦損傷機(jī)制中的作用

2、。
　　方法：建立慢性氟中毒動(dòng)物模型：SD大鼠60只，雌雄各半,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、染氟組（飲水氟含量50 mg/L,加入氟化鈉）2組；實(shí)驗(yàn)期為10個(gè)月；氟中毒細(xì)胞模型：體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，分為3組，即正常對(duì)照組、低劑量染氟組（500?mol/L NaF）、高劑量染氟組（5000?mol/L NaF）。觀察大鼠氟斑牙情況；用氟離子選擇電極法測(cè)定大鼠尿氟及骨氟含量；用 Morris水迷宮方法測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；光鏡下觀察大鼠腦

3、組織形態(tài)學(xué)變化（HE及尼氏染色）；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CD11b、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表達(dá)；酶聯(lián)免疫（Elisa）法檢測(cè)TNF?和IL-1?含量；用蛋白印跡（Western Blotting）方法檢測(cè)NF-κB p65、IκBα、Phospho-NF-κB p65和Phospho-IκB-α等因子的蛋白表達(dá)水平；用CCK8法進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)染氟后

4、THP-1細(xì)胞凋亡情況。對(duì)所獲結(jié)果作相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：染氟組大鼠出現(xiàn)不同程度的氟斑牙，尿氟和骨氟含量明顯升高；染氟組大鼠第五天逃避潛伏期較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)，空間探索總次數(shù)顯著減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；組織形態(tài)學(xué)檢查顯示，各組大鼠腦組織HE染色未見(jiàn)明顯改變，但尼氏染色見(jiàn)染氟組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞中尼氏小體染色變淺，數(shù)量變少；免疫組化結(jié)果顯示，染氟組大鼠腦組織中CD11b及GFAP陽(yáng)性表達(dá)較對(duì)照組明

5、顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；染氟組大鼠腦組織中TNF?和IL-1?含量明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；染氟組大鼠腦組織中NF-κB p65及IκBα總蛋白表達(dá)均低于對(duì)照組（P＜0.05），但Phospho-NF-κB p65和Phospho-IκB-α蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組；相關(guān)分析結(jié)果顯示，染氟組大鼠腦組織中Phospho-NF-κB p65表達(dá)水平與TNF?、IL-1?含量成正比，與IκBα表達(dá)成反比。2.體外培養(yǎng)細(xì)胞

6、實(shí)驗(yàn)： CCK8細(xì)胞毒性結(jié)果顯示，用500及5000?mol/L NaF培養(yǎng)細(xì)胞24、48及72小時(shí)后，500?mol/L NaF及以上濃度可明顯降低 THP-1細(xì)胞存活率，呈現(xiàn)存活率與時(shí)間和劑量的負(fù)相關(guān)關(guān)系；細(xì)胞凋亡率隨著染氟時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增高；低、高劑量染氟組 THP-1細(xì)胞炎癥因子TNF?和IL-1?含量明顯高于對(duì)照組（P<0.05）；NF-κB p65、IκBα總蛋白表達(dá)均明顯低于對(duì)照組（P<0.05），而 Phospho-NF