中間層在成釉細胞分化及分泌期的形態(tài)學觀察及礦化相關蛋白的表達研究.pdf

1、牙齒的發(fā)育作為一個上皮．間充質、上皮．上皮交互誘導發(fā)揮重要作用的復雜的多階段過程，在其發(fā)育過程中每個組織結構都會參與其中，各種組織細胞以及各組織細胞之間大量信號分子的產(chǎn)生和信號的傳導都是牙齒正常發(fā)育所必需的。中間層細胞雖數(shù)量不多，但其位置特殊，它緊靠不同分化狀態(tài)的內釉上皮并伴隨整個內釉上皮的分化過程和成釉細胞的分泌過程，由開始時的2-3層細胞結構演變?yōu)閱渭毎Y構，并隨成釉細胞分泌的結束逐漸消失。中間層的建立及其在牙胚發(fā)育中與內釉上皮/成

2、釉細胞間多種信號分子的交互作用，對釉質的正常發(fā)育是必不可少的，中間層在牙胚發(fā)育特別是牙胚形態(tài)發(fā)生中發(fā)揮關鍵作用。 研究目的： 本實驗擬建立鼠牙胚中間層發(fā)育的實驗模型，采用HE染色、免疫組化等技術，明確中間層細胞在釉質形成過程中的形態(tài)學變化，并探討中間層細胞在釉質分泌與礦化過程中的生物學功能，為進一步研究其在成釉細胞分化和釉質形成中的具體作用機制提供理論依據(jù)。 研究方法： 1、建立出生后BALB/C小鼠牙胚

3、中間層發(fā)育HE染色的實驗模型；電鏡觀察其超微結構的變化。 2、采用原位末端標記法(TUNEL法)及SP免疫組織化學技術，觀察中間層及成釉細胞在分化各階段細胞凋亡與增殖的表達情況； 3、SP免疫組化技術檢測ALP、OC、BSP、OPN、DMP1、E-cad、FMN、BGN、DCN等礦化相關蛋白在成釉階段于中間層和成釉細胞中的時空表達。 研究結果： 1、鐘狀晚期細胞處于分化期，中間層為2-3層的多細胞層結構，

4、電鏡下可見少量的粗面內質網(wǎng)、線粒體等細胞器成分，內釉上皮呈柱狀或高柱狀，可見中間層與成釉細胞間的橋粒連接；釉質分泌期，中間層呈明顯的單細胞結構，細胞排列緊密，與周圍組織的界限清楚，成釉細胞呈高柱狀，可見大量釉質的分泌，線粒體、粗面內質網(wǎng)、高爾基復合體等細胞器成分明顯增多，細胞間的橋粒連接明顯；隨著釉質的不斷建立，釉質分泌基本完成，中間層結構已不易辨認，此時牙齒亦部分萌出，電鏡下細胞間聯(lián)系疏松，細胞器成分萎縮變減少。 2、早期中間

5、層細胞PCNA強陽性表達，成釉細胞亦成陽性，牙冠發(fā)育的后期PCNA在兩者中的表達逐漸減弱并消失；凋亡在分化各期的成釉細胞及晚期的中間層細胞中皆有表達，尤其在成熟期成釉細胞中的表達明顯強于釉質形成早期。 3、在釉質形成的階段，ALP、OC、BSP、OPN、DMP1、E-cad和FM在中間層和成釉細胞中有陽性表達，ALP、E-cad在中間層的陽性表達先于成釉細胞，隨分泌過程陽性表達由中間層轉移到成釉細胞；BSP、OPN、DMP1和：

6、FM在中間層和成釉細胞陽性表達僅見于成釉細胞分泌的后期，分泌早期未見陽性表達。 研究結論： 1、在釉質分泌及礦化過程中中間層細胞器成分及與成釉細胞間的連接逐漸增多，提示中間層在釉質形成中起到了一定的物質轉運及營養(yǎng)支持功能。 2、細胞增殖與凋亡是牙齒正常發(fā)育所必需的重要調控機制，中間層細胞與成釉細胞間的增殖與凋亡在時空表達強弱程度變化上具有一致性，具有一定“量”的變化相關性，提示中間層對成釉細胞的分化及釉質形態(tài)的正