紫杉烷類化合物和微管蛋白相互作用模型的建立及其在腫瘤耐藥和阿爾茨海默氏癥研究中的應(yīng)用.pdf

1、紫杉醇(Paclitaxel,商品名Taxol)是一種廣泛用于腫瘤化療的有絲分裂抑制劑,目前成功地用于乳腺癌、肺癌、卵巢癌、卡波氏肉瘤等多種惡性腫瘤的治療。紫杉醇的作用機(jī)理是通過和微管蛋白結(jié)合,誘導(dǎo)和穩(wěn)定微管蛋白聚合成微管并抑制其解聚,使微管不能與微管組織中心相互連接,細(xì)胞周期停滯于G2/M期,最終導(dǎo)致有絲分裂異?；蛘咄Ｖ?使癌細(xì)胞無法繼續(xù)分裂凋亡。
　　 紫杉醇和其靶點(diǎn)微管蛋白的相互作用研究對于人們深入的理解其作用機(jī)制,并利用

2、該機(jī)制進(jìn)行紫杉烷類化合物構(gòu)效關(guān)系研究、新型抗耐藥紫杉烷類化合物的研究、紫杉烷類化合物新用途的開發(fā)等等都有重要的意義。
　　 本文致力于構(gòu)建一系列分子水平的模型來反映紫杉烷類化合物和微管蛋白的相互作用,并將其應(yīng)用于尋找抗腫瘤耐藥和阿爾茨海默病的化合物的研究當(dāng)中。本文運(yùn)用兩種方法提取純化得到了高純度的微管蛋白(W-tubulin)和含有MAPs的微管蛋白——MTP,然后利用紫杉烷類熒光探針的熒光強(qiáng)度和熒光偏振的變化建立了測定微管蛋白

3、和紫杉烷類化合物相互作用的結(jié)合常數(shù)Kb(Binding constant)的方法,對于高親和力的化合物,采用HPLC檢測的方法測定他們的結(jié)合常數(shù),并將結(jié)合常數(shù)的測定應(yīng)用于抗腫瘤耐藥的化合物和微管蛋白的結(jié)合性質(zhì)評價上。本文還通過熒光物質(zhì)DAPI作為指示,檢測微管蛋白在紫杉烷類化合物的作用下的聚合效應(yīng),測得微管聚合的EC50,比傳統(tǒng)的濁度法具有更高的靈敏度,該法已用于評價潛在的抗AD藥物對微管的穩(wěn)定作用。此外,還建立了測定微管蛋白聚合的臨界