有機鉍（銻）配合物的合成、表征及其促肺腺癌細胞凋亡的相關(guān)研究.pdf

1、目的:合成高價環(huán)狀有機鉍（銻）配合物，篩選低毒、選擇性強、對腫瘤細胞生長具有良好抑制作用的配合物，并對探討其作用機理。
　　方法:
　　(1)設(shè)計、合成含O、N配位原子的配體前驅(qū)體，以此前驅(qū)體為原料合成高價環(huán)狀有機鉍（銻）配合物，利用核磁共振、熔點測定、元素分析和X射線單晶衍射等分析技術(shù)對產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進行鑒定。
　　(2)紫外分光光度計檢測有機鉍（銻）配合物與小牛胸腺DNA(CT-DNA)的作用模式。
　　(3)以

2、人肺腺癌細胞A549、肝癌細胞HepG2、食管癌細胞Ec109等為模型，采用CCK-8法從配合物中篩選能有效抑制腫瘤細胞生長的配合物。
　　(4)通過激光共聚焦顯微鏡觀察配合物作用下A549細胞的形態(tài)學(xué)變化及凋亡現(xiàn)象。
　　(5)利用流式細胞術(shù)檢測藥物處理后細胞周期的改變及凋亡率。
　　(6)用實時熒光定量PCR和Western blot法測定凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　(1)利用含O、N配

3、位原子的配體前驅(qū)體成功合成了6種高價環(huán)狀有機鉍配合物和6高價有機銻配合物，并確定了它們的分子結(jié)構(gòu)。
　　(2)紫外分光光度計證實鉍（銻）配合物以插入方式與DNA分子結(jié)合。
　　(3)采用CCK-8法從配合物中篩選出能有效抑制腫瘤細胞生長的[t-BuN(CH2C6H4)2]BiCl(2a)、[O(CH2C6H4)2]BiCl(2d)、[O(CH2C6H4)2]BiNO3(2e)、[t-BuN(CH2C6H4)2] SbCl(3

4、a)和[{ t-BuN(CH2C6H4)2} Sb]2O(3d)。其作用A549細胞48 h的IC50分別為2.2μmol/L、4.7μmol/L、4.6μmol/L、6.6μmol/L和3.5μmol/L。
　　(4)激光共聚焦顯微鏡下觀察到經(jīng)有機鉍（銻）配合物處理，A549細胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，且具有劑量依賴性。
　　(5)流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，10μmol/L鉍配合物2a、2d和2e處理A549細胞48 h后，多數(shù)細胞阻

5、滯于S期，其凋亡率分別達16.07％、38.02％和36.69％;10μmol/L銻配合物3a和3d阻滯細胞周期于G2/M期，凋亡率分別為9.08％和16.17％。
　　(6)有機鉍配合物2a、2d和2e處理細胞后，與對照組相比，細胞中Bax/Bcl-2 mRNA均有增加;經(jīng)配合物2a處理后，細胞Caspase-3、Caspase-8基因表達下調(diào)(P＜0.01);經(jīng)配合物2d處理后，細胞Caspase-8基因表達水平降低(P＜0.

6、01）;而配合物2e對Caspase基因表達的影響無統(tǒng)計學(xué)意義。有機銻配合物3a和3d處理A549細胞后，與對照組比較，細胞Bax/Bcl-2 mRNA表達比值均上升;經(jīng)配合物3a作用的細胞Caspase-3和Caspase-9 mRNA表達減少(P＜0.01）;配合物3d促進Caspase-9基因表達(P＜0.01）。配合物2a作用后Bax/Bcl-2蛋白比值增大;2d和2e促進Bax蛋白表達，抑制Bcl-2蛋白表達，Bax/Bcl-

7、2比值升高，Caspase-3蛋白表達也增強;有機銻配合物3a、3d對細胞Caspase-3蛋白表達影響不大，但它們使Bax蛋白表達增強，Bcl-2蛋白表達降低，Bax/Bcl-2比值升高。
　　結(jié)論:
　　(1)有機鉍（銻）配合物以插入方式與DNA分子作用。
　　(2)有機鉍（銻）配合物可阻滯細胞周期，抑制腫瘤細胞的生長，且具有時效和量效關(guān)系。
　　(3)有機鉍（銻）配合物誘導(dǎo)的細胞凋亡可能與Bcl-2的下調(diào)及