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1、目的:構(gòu)建人羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架上三維培養(yǎng)模型,觀察人羊膜細(xì)胞能否在纖維蛋白支架上生長;觀察人羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架上的生物學(xué)特性,探討人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物模擬正常羊膜組織用于胎膜早破破口修復(fù)的新途徑。 方法:1、原代培養(yǎng)并分離純化人羊膜上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞。2、采用膠內(nèi)型三維立體培養(yǎng),在纖維蛋白聚合前,將羊膜間質(zhì)細(xì)胞和纖維蛋白溶液混合,纖維蛋白聚合后,采用膠上型三維立體培養(yǎng),將羊膜上皮細(xì)胞接種到纖維蛋白支架表面,構(gòu)建
2、人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物,模擬正常羊膜組織。3、采用掃描電鏡觀察纖維蛋白支架的形態(tài);纖維蛋白支架表面人羊膜上皮細(xì)胞的形態(tài);細(xì)胞間的接觸;細(xì)胞與支架的接觸。采用透射電鏡觀察在纖維蛋白膠內(nèi)生長的人羊膜間質(zhì)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)和纖維蛋白束的形成。耦合羅丹明的鬼筆環(huán)肽染色可特異性的標(biāo)記顯示細(xì)胞骨架中的微絲(F-actin)結(jié)構(gòu),激光共聚焦逐層掃描,觀察不同深度層面的信息,并通過計(jì)算機(jī)軟件處理,對(duì)人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物進(jìn)行三維重建。4、繪
3、制羊膜細(xì)胞在普通平面培養(yǎng)和三維立體培養(yǎng)中的生長曲線,觀察羊膜細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件下的增殖。5、制備羊膜細(xì)胞三維培養(yǎng)模型,動(dòng)態(tài)觀察羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架中的游走,并觀察在不同條件下纖維蛋白膠的收縮。 結(jié)果:1、人羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架上生長良好,細(xì)胞沿支架伸展,細(xì)胞間有偽足伸出,細(xì)胞分泌功能良好。人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物表面的上皮細(xì)胞分布在同一平面,形成片狀,羊膜間質(zhì)在內(nèi)部分布在不同平面,與正常羊膜組織類似。2、羊膜細(xì)胞在普通
4、平面培養(yǎng)下,增殖能力旺盛,在三維立體培養(yǎng)中增殖較緩慢,增長幅度較平面培養(yǎng)低。3、羊膜間質(zhì)細(xì)胞隨時(shí)間推移在纖維蛋白支架中游走,形成細(xì)胞團(tuán)。4、在含羊膜間質(zhì)細(xì)胞的支架復(fù)合物中,纖維蛋白膠隨時(shí)間增長而發(fā)生收縮。 結(jié)論:1、人羊膜上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞在纖維蛋白支架上生長良好,羊膜細(xì)胞和纖維蛋白支架相互作用,模擬了羊膜細(xì)胞在體內(nèi)的生物學(xué)環(huán)境。2、人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物有可能成為胎膜早破破口修復(fù)的組織替代物,為胎膜早破的治療提供新方法
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