Bcl-2、Bax及細胞凋亡在肢體缺血再灌注損傷時軟骨中的表達及意義.pdf

1、目的：通過觀察大鼠肢體缺血再灌注損傷（LIRI）時不同時相軟骨細胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表達水平的變化，探討B(tài)cl-2、Bax蛋白在LIRI模型軟骨細胞凋亡中所起的作用及相互關(guān)系。 方法：將40只SD大鼠隨機分為對照組（假手術(shù)組）、缺血組、缺血6h再灌注1天、3天、7天、14天、30天及60天組，每組5只，均取左后肢為實驗側(cè)。根據(jù)陳建常[10]的方法建立大鼠肢體缺血再灌注模型。分別于再灌注后相應時間點分批處死動物，取左脛骨

2、平臺內(nèi)側(cè)軟骨組織，以4％的多聚甲醛固定24小時，經(jīng)脫鈣、脫水、二甲苯透明及石蠟包埋后，4μm連續(xù)切片。采用TUNEL法觀察軟骨細胞凋亡情況；免疫組化技術(shù)檢測軟骨中Bcl-2及Bax蛋白表達水平的變化。所有數(shù)據(jù)均以X±S表示，采用SPSS13.0進行統(tǒng)計分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：1.細胞凋亡的變化：對照組未見凋亡細胞；缺血組少見凋亡細胞（3.44±1.17）；隨再灌時間延長，凋亡細胞數(shù)上調(diào)，再灌7天達到高峰（2

3、4.36±2.24）；以后凋亡細胞數(shù)有所下降，但再灌60天的凋亡細胞數(shù)與對照組及缺血組相比仍有顯著差異（P<0.01）。再灌各組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義。 2.Bcl-2蛋白表達的變化：對照組軟骨表中層Bcl-2弱陽性表達，灰度值為（156.78±10.42）；缺血組陽性表達明顯增強，灰度值為（132.74±9.18）；再灌3天陽性表達至高峰，灰度值為（93.30±7.55）；再灌7天后各組陽性表達逐漸減弱，灰度值分別為（1

4、06.02±7.73，117.34±9.15，127.58±10.92，130.14±9.19）。再灌各組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。 3. Bax蛋白表達的變化：對照組軟骨表層Bax輕度陽性表達，灰度值為（139.68±7.15）；隨著再灌注時間延長，其陽性表達不斷上調(diào)，至再灌7天時達到高峰，灰度值為（82.00±8.58）；隨后Bax陽性表達又逐漸下調(diào)，再灌60天灰度值為（115.72±9.99）。再灌各組