糖尿病患者高密度脂蛋白中血清淀粉樣蛋白A的分布及其抑制粘附分子表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、2型糖尿病病人最大的死亡原因來自于冠脈事件，其冠心病死亡風(fēng)險(xiǎn)與既往發(fā)生過急性心梗的患者相當(dāng)。在糖尿病患者體內(nèi)，內(nèi)皮功能受損促進(jìn)了早期粥樣斑塊形成。
　　 白細(xì)胞向血管壁內(nèi)的遷移運(yùn)動(dòng)是發(fā)生冠脈粥樣硬化早期的重要過程。損傷后的內(nèi)皮增加了細(xì)胞粘附分子的表達(dá)，如血管細(xì)胞粘附分子(vascular cell adhesionmolecule-1，VCAM-1)、細(xì)胞間粘附分子(intracellular adhesion molecule

2、-1，ICAM-1)等，這些粘附分子介導(dǎo)白細(xì)胞牢固的粘附在內(nèi)皮細(xì)胞上并最終穿過內(nèi)皮完成遷移過程，隨著遷移到內(nèi)皮下的白細(xì)胞增多，粘附分子促進(jìn)了粥樣斑塊的形成。有研究證實(shí)無(wú)論是分離自人類血漿的HDL還是在體外人工合成的HDL都有抑制內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子的作用，并且具有濃度及時(shí)間依賴性。
　　 本研究旨在比較糖尿病及冠心病患者與正常人HDL對(duì)粘附分子抑制功能的影響，并且研究其與HDL中SAA、apoA1含量改變的相關(guān)性。
　　

3、 目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)的目的在于收集正常人群、糖尿病人群、冠心病人群和糖尿病合并冠心病人群血漿，分離HDL成分，檢測(cè)其對(duì)粘附分子表達(dá)數(shù)量及細(xì)胞粘附功能的影響，并明確SAA及apoA1含量變化與抑制粘附功能改變的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 1.收集單純糖尿病患者、糖尿病合并冠心病患者以及單純冠心病患者血漿樣本；
　　 2.通過密度梯度離心分離脂蛋白；
　　 3.用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法檢測(cè)

4、各種脂蛋白的SAA及apoA1的含量；
　　 4.臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中加入不同患者的HDL，孵育4小時(shí)，再加入TNF-α刺激4小時(shí)，抗人CD54-PE單克隆抗體標(biāo)記后流式細(xì)胞儀檢測(cè)平均熒光強(qiáng)度，從而獲得其ICAM-1表達(dá)水平；
　　 5.臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中加入不同患者的HDL，孵育4小時(shí)，再加入TNF-α刺激4小時(shí)，抗人CD106-PE單克隆抗體標(biāo)記后流式細(xì)胞儀檢測(cè)平均熒光強(qiáng)度，從而獲得其VCAM-1表達(dá)水平；
　　

5、6.臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中加入不同患者的HDL，孵育4小時(shí)，再加入TNF-α刺激24小時(shí)后加入Calcein-AM熒光染色劑標(biāo)記的rHP-1細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)平均熒光強(qiáng)度，從而獲得其粘附細(xì)胞數(shù)量；
　　 7.應(yīng)用SPSSV11.5軟件，采用非參數(shù)檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)分析處理檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.入選患者各組間基礎(chǔ)人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特點(diǎn)、臨床生化指標(biāo)和既往病史無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；
　　

6、 2.HDL中SAA含量在正常人群中較低，在單純糖尿病、單純冠心病及糖尿病合并冠心病患者中較高(p-0.001)；
　　 3.與TNF-α刺激試劑對(duì)照組相比，正常人群對(duì)照組、糖尿病患者組、冠心病患者組及冠心病合并糖尿病患者組ICAM-1表達(dá)水平均明顯下降(P<0.05)。
　　 4.與TNF-α刺激試劑對(duì)照組相比，正常人群對(duì)照組及各患病組VCAM-1表達(dá)水平均明顯下降(P<0.01)。與加入正常人群HDL的對(duì)照組相比，

7、糖尿病合并冠心病患者組VCAM-1表達(dá)水平明顯下降(p=0.026)；
　　 5.與TNF-α刺激試劑對(duì)照組相比，正常人群對(duì)照組及單純冠心病患者對(duì)照組THP-1平均熒光強(qiáng)度顯著降低(pn=0.012、pc=0.017)。與正常人群對(duì)照組相比，單純糖尿病組THP-1平均熒光強(qiáng)度明顯升高(p=0.038)；
　　 6.HDL中apoAl對(duì)粘附因子表達(dá)數(shù)量及THP-1粘附功能沒有明顯影響。
　　 結(jié)論：
　　

8、1.正常人群HDL中SAA的含量明顯低于單純糖尿病人群、單純冠心病人群及糖尿病合并冠心病人群；而在糖尿病及冠心病人群中，HDL的SAA含量并無(wú)明顯差異；
　　 2.正常人群、單純冠心病患者、單純糖尿病患者及糖尿病合并冠心病患者對(duì)ICAM-1表達(dá)均有明顯抑制作用；
　　 3.正常人群、單純冠心病患者、單純糖尿病患者及糖尿病合并冠心病患者的HDL對(duì)VCAM-1表達(dá)均有明顯抑制作用，其中糖尿病合并冠心病患者HDL的抑制作用最強(qiáng)