基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1、2在慢性酒精中毒性肌病中表達的研究.pdf

1、慢性酒精中毒性肌病(Chronic alcoholic myopathy，CAM)是由于長期酗酒引起的一種肌肉病，在嗜酒者中發(fā)病率約40％-60％，臨床主要表現(xiàn)為肌無力、肌痛和肌萎縮，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。然而對其發(fā)病機制的研究卻遠遠較酒精性肝病、酒精性心肌病為少。有資料表明基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-2(TIMP-2)在一些肌病肌萎縮和肌細胞的細胞外基質(zhì)(ECM)纖維化中發(fā)揮重要作用。本實

2、驗旨在研究慢性酒精性肌病的發(fā)病過程中這些因子是否有表達。若能證明這些因子在酒精性肌病發(fā)病中發(fā)揮作用，則可以通過控制其生物學活性治療該病，這對于慢性酒精性肌病發(fā)病機理的研究和防治有著重要意義。 目的：本實驗旨在建立大鼠慢性酒精中毒性肌病模型的基礎(chǔ)上，觀察TIMP-1和TIMP-2在酒精中毒性肌病中的表達情況。探討其在慢性酒精中毒性肌病發(fā)病過程中可能起到的作用，從基因和蛋白水平進一步闡述該病發(fā)病機制，為慢性酒精中毒性肌病的臨床防治提

3、供理論依據(jù)，同時對于其他代謝性肌病的研究也提供一個平臺。 方法：(1)選健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠建立慢性酒精中毒性大鼠肌病模型，觀察酒精灌胃前后大鼠體重、行為學變化及肌肉組織病理改變。(2)實驗組用酒精給大鼠灌胃，對照組用含與酒精體積相等的生理鹽水灌胃，兩組均喂飼改良的全營養(yǎng)高脂飼料，于12周后，取后肢肌肉，在分離出腓腸肌、比目魚肌、跖肌后，將各類肌肉均分別地制備成冰凍切片，經(jīng)組織化學染色確認成模。(3)

4、采用RT-PCR和Western blot的方法分別檢測實驗組和對照組大鼠骨骼肌中TIMP-1和TIMP-2的表達的差異。 結(jié)果： (1)酒精染毒后，Ⅱ型肌纖維較Ⅰ型肌纖維病理損害更嚴重，酒精染毒大鼠出現(xiàn)了肌纖維變性、壞死，肌纖維萎縮呈三角形、條形或不規(guī)則形改變，肌間質(zhì)結(jié)締組織增生等典型的病理改變。 (2)RT-PCR結(jié)果顯示在慢性酒精中毒性肌病中，TIMP-1的表達水平增高，尤其是在腓腸肌更為明顯，TIMP-2

5、的表達不升高或升高不明顯。 (3)Western blot檢測結(jié)果顯示在慢性酒精中毒性肌病中，TIMP-1的表達水平增高，酒精能夠激活和促進TIMP-1的表達，與RT-PCR結(jié)果相似，TIMP-2的表達不升高或升高不明顯。 結(jié)論： (1)TIMP-1的增高可能參與了骨骼肌間質(zhì)纖維增生及其構(gòu)成的改變(Ⅰ和Ⅲ型增多，Ⅰ型膠原與Ⅲ型膠原比值增高)，誘導(dǎo)炎性細胞浸潤，加重慢性酒精中毒性肌病的發(fā)生發(fā)展。 (2)TI