iASPP反義基因磁性納米顆粒的初步構(gòu)建及鑒定.pdf

1、背景和目的:
　　 胰腺癌是一種惡性度極高、預后極差的腫瘤。p53基因是與胰腺癌發(fā)生高度相關(guān)的抑癌基因，與之相關(guān)的p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulatingprotein of p53，ASPP)是新近發(fā)現(xiàn)的一個蛋白家族.包括ASPP1、ASPP2和凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP，inhibitory member of the ASPP family)三個成員，其中iASPP是一種導致腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵癌蛋白

2、，能夠特異性抑制野生型p53誘導目的基因轉(zhuǎn)錄活化和促細胞凋亡功能。iASPP是p53最為保守的抑制蛋白，因此是一個非常理想的分子靶。
　　 本課題通過人工合成iASPP的反義基因，探討iASPP反義基因的穩(wěn)定性以及對胰腺癌細胞的生物學影響；探討iASPP反義基因與磁性納米顆粒結(jié)合的可能性，并驗證磁性納米顆粒對反義基因的保護作用以及在磁場中能夠定向移動的特性。
　　 材料和方法:
　　 首先，通過基因工程的方法，人

3、工設計iASPP的反義基因，并使用DNA合成儀合成iASPP的反義基因。同時，培養(yǎng)胰腺癌細胞SW1990，進行iASPP反義基因在SW1990培養(yǎng)液中穩(wěn)定性的研究以及對SW1990的增殖及凋亡的影響。其次，通過iASPP反義基因與構(gòu)建好的磁性納米顆粒進行耦合，構(gòu)建iASPP反義基因磁性納米顆粒，并在電鏡下觀察磁性納米顆粒結(jié)合反義基因后的磁性納米顆粒的形態(tài)。最后，通過磁性納米顆粒能夠保護iASPP反義基因防止核酸酶的消化試驗以及能夠在高磁

4、場中定向移動的試驗，來鑒定iASPP反義基因磁性納米顆粒特性。
　　 結(jié)果:
　　 人工合成的iASPP的反義基因，末端以硫代磷酸化修飾，在胰腺癌細胞SW1990培養(yǎng)液中至少3天是穩(wěn)定的，明顯抑制腫瘤細胞株的增殖，最高抑制率可高達91.16％。并通過觀察細胞周期可看到G0/G1期阻滯增加，S期減少，表明iASPP的反義核酸通過將細胞阻滯在G0/G1期，減少進入S期的細胞數(shù)目，減少DNA復制，并導致腫瘤細胞凋亡。這與p53

5、的抑癌作用相似。
　　 iASPP的反義基因能夠在與磁性納米顆粒各種質(zhì)量比的情況下都能較好的結(jié)合，電鏡下觀察可見磁性納米顆粒呈不規(guī)則形狀，中心為一鐵顆粒，直徑<100nm。在DNA保護試驗中能夠很好保護反義基因抵御消化酶消化作用；并且能夠在磁場中進行定向移動，在施加磁場后的20分鐘后，反義基因納米顆粒定向移動到高磁場區(qū)域。
　　 結(jié)論:
　　 1.人工合成的iASPP反義寡核苷酸，通過末端的硫代磷酸化修飾在胰腺癌