胰島-內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合體對IBMIR的影響.pdf

1、目的： 胰島移植雖然發(fā)展前景良好，但仍面臨著需要供胰量大，存活率較低，自身免疫性疾病復(fù)發(fā)所致移植物失功等問題。在臨床經(jīng)門靜脈胰島移植中，移植后大量胰島丟失是主要的問題之一。在移植過程中，注入門靜脈的胰島與血液接觸，發(fā)生一種凝血/炎癥反應(yīng)過程，我們稱之為立即經(jīng)血液介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)(IBMIR)。IBMIR以凝血和補(bǔ)體系統(tǒng)的快速激活，胰島內(nèi)白細(xì)胞的募集和滲入，血小板的快速粘合和激活為特征。組織因子是IBMIR的主要啟動因子。本實(shí)驗(yàn)旨在

2、觀察經(jīng)胰島-內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合體的方法預(yù)處理的胰島對IBMIR的影響，為臨床胰島移植胰島預(yù)處理提供一種有效的新方法。 材料與方法： 1、實(shí)驗(yàn)動物及分組 本實(shí)驗(yàn)采用雄性Wistar大鼠(中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)，體重250～300g。實(shí)驗(yàn)分為三組：一組將分離、純化的胰島和大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞混合培養(yǎng)，形成胰島-內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合體，稱為實(shí)驗(yàn)組；一組將分離、純化的胰島直接置于CMRL1066培養(yǎng)液中培養(yǎng)，稱為對照組；一組為P

3、BS液，稱為陰性對照組。 2、胰島、內(nèi)皮細(xì)胞的獲取，胰島—內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合體的制備，胰島功能的測定和模擬體內(nèi)循環(huán)模型的建立 大鼠胰腺原位灌注消化液、不連續(xù)密度梯度離心法獲得純化胰島。膠原酶消化貼片法獲取大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞，并傳代培養(yǎng)。胰島、內(nèi)皮細(xì)胞混合培養(yǎng)5天，獲得內(nèi)皮細(xì)胞包被的胰島，即胰島—內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合體。培養(yǎng)過程中進(jìn)行葡萄糖刺激試驗(yàn)以測定胰島素釋放指數(shù)。實(shí)驗(yàn)組、對照組及PBS陰性對照組分別置于模擬體內(nèi)循環(huán)模型的3個管中反

4、應(yīng)，分別于灌注前，5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘留取血漿進(jìn)行分析。 3、觀察指標(biāo) 對不同時間陰性對照組、對照組和實(shí)驗(yàn)組血漿中的TAT、C3a、血小板的數(shù)量進(jìn)行測量和統(tǒng)計(jì)。通過HE染色和免疫組化染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 將所得數(shù)據(jù)用均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，采取t檢驗(yàn)和方差分析，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所有數(shù)據(jù)用SPSS11.5軟件處理。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)組和對照組血漿中的TAT