β-TCP-HIF-1α緩釋復合體對預血管化膜片內皮血管網(wǎng)形成的影響.pdf

1、目的：本研究欲將不同濃度下的缺氧誘導因子-1α（hypoxia induced factor-1α,HIF-1α）和支架材料β-磷酸三鈣（β-tricalcium phosphate,β-TCP）復合形成緩釋復合體。一方面，研究不同濃度下的β-TCP\HIF-1α緩釋復合體對人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的招募和遷移作用；另一方面，基于預血管化的細胞膜片技術

2、（cell sheet technology,CST），研究不同濃度下的β-TCP\HIF-1α緩釋復合體對內皮血管網(wǎng)形成的作用和影響，以期為優(yōu)化構建穩(wěn)定而豐富的三維預血管化網(wǎng)絡的工程骨組織提供進一步的理論指導。
　　方法：(1)β-TCP\HIF-1α緩釋復合體的構建：將HIF-1α配成濃度為50，100，200mg/L的溶液，無菌過濾分裝。將高溫高壓烘干后的β-TCP支架材料放入HIF-1α溶液中浸泡備用（浸泡3天）；HIF-

3、ELISA試劑盒用于各實驗組不同時間點緩釋能力的檢測。（2）HUVECs遷移實驗和預血管化的fBMSCs膜片的構建：胎兒骨髓間充質干細胞(fetal bone marrow mesenchymal stem cell,fBMSCs)和HUVECs的培養(yǎng)擴增；Transwell遷移實驗檢測不同濃度梯度下的β-TCP\HIF-1α緩釋復合體（0，50，100，200mg/L）和單純100mg/L的HIF-1α對HUVECs的招募和遷移，經染

4、色處理、顯微拍照后軟件計數(shù)，統(tǒng)計學分析各組差異性。將fBMSCs按9×104個/cm2的密度置于六孔板內進行成膜培養(yǎng)14天（fBMSCs膜片）；HUVECs按5×104個/cm2的密度播種至fBMSCs膜片上進行體外預血管化的構建；大體觀、顯微鏡觀察獲取膜片特征。（3）β-TCP\HIF-1α緩釋復合體對預血管化的fBMSCs膜片內皮血管網(wǎng)形成的影響：將單純的β-TCP支架組、β-TCP\HIF-1α緩釋組（50，100，200mg/L

5、）和100mg/L的單純HIF-1α因子組，分別放入育有預血管化的fBMSCs膜片的六孔板中，分別在實驗的第1，3，7，14天進行CD31免疫熒光染色檢測，觀察不同實驗組中內皮血管網(wǎng)形成的情況。
　　結果：（1）β-TCP\HIF-1α緩釋復合體均在第三天緩釋濃度達到高峰，后期逐漸降低；21天后，各組的累積釋放率均>85％。（2）fBMSCs呈長梭形、HUVECs呈“鋪路石”般卵圓形。fBMSCs經14天連續(xù)培養(yǎng)可形成一層完整而菲

6、薄的fBMSCs膜片，邊緣向內卷曲，可用鑷子沿邊緣提起。（3）Transwell實驗證實HIF-1α具有體外招募和遷移HUVECs的作用，且以100mg/L HIF-1α組作用最為顯著（P<0.05）。(4)β-TCP\HIF-1α緩釋復合體對預血管化的fBMSCs膜片內皮血管網(wǎng)形成的影響結果顯示，200mg/L的β-TCP\HIF-1α緩釋復合體組(第7天)和100mg/L的HIF-1α組（第3天）形成的預血管化網(wǎng)絡數(shù)量最多（P<0.