尿毒清膠囊抗腎纖維化作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：(1)了解中西醫(yī)對(duì)腎纖維化發(fā)病機(jī)制及其防治措施的研究進(jìn)展；(2)觀察升清泄?jié)岱ㄖ兴幹苿┠蚨厩迥z囊對(duì)慢性腎功能衰竭患者臨床療效的同時(shí)，重點(diǎn)觀察其抗腎纖維化的療效；(3)探討尿毒清膠囊抗腎纖維化作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：(1)文獻(xiàn)研究：通過(guò)查閱大量古代和現(xiàn)代中、西醫(yī)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，總結(jié)和評(píng)價(jià)有關(guān)腎纖維化的中醫(yī)、西醫(yī)發(fā)病機(jī)制和防治措施研究現(xiàn)狀。(2)臨床研究：用簡(jiǎn)單隨機(jī)化、前瞻性的研究方法，將78例慢性腎功能衰竭患者

2、按1：1分為治療組和對(duì)照組。治療組用基本治療加尿毒清膠囊，對(duì)照組為基本治療加包醛氧淀粉，觀察患者主要癥狀、證候(納差腹脹，惡心嘔吐，神疲乏力，腰膝酸痛，皮膚瘙癢，顏面唇甲少華，肌膚甲錯(cuò)，形寒肢冷，手足心熱，浮腫，頭暈)和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)：血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞總數(shù)(RBC)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)、血清白蛋白(ALB)、血清總膽固醇(Tch)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高

3、密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、血清層粘蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PC-Ⅲ)、透明質(zhì)酸(HA)等，4周為一療程，連續(xù)治療兩個(gè)療程統(tǒng)計(jì)結(jié)果。繼續(xù)追蹤治療至6個(gè)月時(shí)統(tǒng)計(jì)各組因病情加重放棄內(nèi)科治療，而改用透析治療的病例數(shù)。(3)實(shí)驗(yàn)研究：將體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)，分為6組：正常對(duì)照組、5％尿毒癥血清組、10％尿毒癥血清組、5％尿毒清膠囊含藥血清組、10％尿毒清膠囊含藥血清組和蒙諾組(蒙諾濃度為10-6mmol/L)，用MTT法檢

4、測(cè)細(xì)胞增殖、用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、a-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)陽(yáng)性細(xì)胞的百分率、用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定結(jié)締組織生長(zhǎng)因子mRNA(CTGFmRNA)。 結(jié)果：(1)文獻(xiàn)研究：中醫(yī)學(xué)沒(méi)有腎纖維化的表述，但根據(jù)其臨床表現(xiàn)可歸于“水腫”、“關(guān)格”、“癃閉”、“虛勞”等病癥范疇；在病因病機(jī)方面，認(rèn)為脾腎虧虛是本，濕熱壅滯三焦，濁毒內(nèi)盛、瘀血阻絡(luò)等為標(biāo)；治療上多采用通腑泄?jié)釣橹?，兼用益氣補(bǔ)腎、活血化瘀等法。藥物有

5、復(fù)方制劑、也有單味藥物，還有提取的有效單體成分；作用機(jī)制有：抑制參與纖維化細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)分化，抑制致纖維化因子的產(chǎn)生、減少ECM的沉積等，表現(xiàn)出較好的療效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎纖維化涉及到腎固有細(xì)胞的激活、增殖，單核巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)、炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌，最終導(dǎo)致腎臟正常結(jié)構(gòu)的破壞、細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，形成纖維化。上皮—間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)在腎纖維化中起重要作用，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)和CTGF是強(qiáng)致腎纖維化因子。從

6、防治措施來(lái)講，尋找抑制參與纖維化細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)分化、抑制致纖維化因子的分泌或拮抗其作用的藥物，雖然有些用于臨床，但療效不理想。(2)臨床研究：治療組主要癥狀總積分、大部分癥狀單項(xiàng)積分均少于對(duì)照組(p＜0.05或p＜0.01)，癥狀有效率和總體療效高于對(duì)照組(p＜0.05或p＜0.01)；尿毒清膠囊能提高慢性腎功能衰竭患者血清ALB、HDL-C、降低Tch、TG、BUN、Scr、Ccr、LN、PC-Ⅲ、HA等，還能減少同期內(nèi)需要透析的病例

7、數(shù)(p＜0.05或p＜0.01)，但對(duì)RBC、HGB的升高作用與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(p＞0.05)。不同腎功能狀況對(duì)尿毒清膠囊的療效有影響，尿毒癥期療效較腎功能不全失代償期和衰竭期差；證型對(duì)療效影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)實(shí)驗(yàn)研究：①M(fèi)TT法示5％尿毒癥血清組和10％尿毒癥血清組A490值均高于正常對(duì)照組(p＜0.01)、5％尿毒清膠囊含藥血清組與5％尿毒癥血清組差異無(wú)顯著性(p＞0.05)、而10％含藥血清組和蒙諾組均低于5％尿毒癥血清

8、組(均為p＜0.01)、三個(gè)用藥組及正常組間差異無(wú)顯著性(p＞0.05)；②流式細(xì)胞儀檢測(cè)G0/G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，5％尿毒癥血清組和10％尿毒癥血清組低于正常對(duì)照組(均為p＜0.01)，這兩組間無(wú)顯著性差異(p＞0.05)'5％含藥血清組、蒙諾組、10％含藥血清組均高于5％尿毒癥血清組(均為p＜0.01)，這三組之間差異無(wú)顯著性(p＞0.05)，5％含藥血清組低于正常對(duì)照組(p＜0.05)，蒙諾組、10％含藥血清組與正常組無(wú)差異(p＞0

9、.05)；③細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)，5％尿毒癥血清組、10％尿毒癥血清組及5％含藥血清組均高于正常對(duì)照組(p＜0.01)，蒙諾組和10％含藥血清組與正常對(duì)照組間均無(wú)顯著性差異(p＞0.05)，而蒙諾組、5％含藥血清組、10％含藥血清組均低于5％尿毒癥血清組(p＜0.01)，三個(gè)藥物治療組間差異無(wú)顯著性(p＞0.05)。④HK-2細(xì)胞α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞百分率，5％尿毒癥血清組和10％尿毒癥血清組極顯著高于正常對(duì)照組(p＜0.01)，而這兩組

10、之間差異無(wú)顯著性(p＞0.05)；5％含藥血清與5％尿毒癥血清組無(wú)顯著性差異(p＞0.05)，也高于正常組(p＜0.01)；10％含藥血清和蒙諾組與5％尿毒癥血清組相比，均有極顯著性降低(p＜0.01)，但仍高于正常對(duì)照組(p＜0.05)；而三個(gè)加藥組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。⑤CTGFmRNA表達(dá)，各尿毒癥血清組、含藥血清組和蒙諾組較正常對(duì)照組均有極顯著性升高(p＜0.01)，其中10％尿毒血清組最高(p＜0.01)，5％

11、含藥血清組與5％尿毒癥血清組無(wú)差異(p＞0.05)，而10％含藥血清組和蒙諾組較5％尿毒癥血清組均有顯著性下降(p＜0.05)，而5％、10％含藥血清組和蒙諾組之間比較差異均無(wú)顯著性(p＞0.05)。 結(jié)論;(1)慢性腎功能衰竭、腎臟纖維化的發(fā)病機(jī)制是復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)機(jī)制，具體環(huán)節(jié)尚不清楚，防治措施大部分尚在實(shí)驗(yàn)、研究階段，臨床療效不理想。中醫(yī)藥在抗腎纖維化方面具有很好的研究和臨床應(yīng)用前景。(2)中藥升清泄?jié)岱ㄖ苿┠蚨厩迥z囊，不僅能改