基于Wnt-β-catenin信號通路研究腎纖康顆?？鼓I間質纖維化作用及機制.pdf

1、目的:
　　采用單側輸尿管梗阻(UUO)方法構建大鼠腎間質纖維化模型，以苯那普利為對照藥物，觀察中藥復方腎纖康顆粒對UUO模型大鼠腎功、腎小管間質損傷指數(shù)、腎間質纖維化程度以及對Wnt/β-catenin信號轉導通路的影響，探討腎纖康顆?？鼓I間質纖維化的作用及其機制。
　　方法:
　　將60只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠隨機分為假手術組（SOR組）、UUO模型組（UUO組）、UUO模型+苯那普利治療組（

2、洛汀新組）、UUO模型+腎纖康顆粒治療組（腎纖康組），每組15只。SOR組僅切開腹腔而不結扎輸尿管，其余各組均構建UUO模型，從術后第一天開始給藥，腎纖康組給予腎纖康顆粒（4.2g/kg·d）灌胃治療，洛汀新組給予苯那普利（10mg/kg·d）灌胃治療，SOR組和UUO組給予等體積蒸餾水灌胃。分別于術后第7天、14天和21天每組隨機選擇5只大鼠處死，稱取大鼠腎重和體重，計算腎臟肥大指數(shù)（腎重/體重，KW/BW），檢測24小時尿蛋白定量、

3、肌酐(Scr)、尿素氮（BUN）、腎臟HE及Masson染色，采用免疫組織化學染色法和Western blot檢測腎組織Wnt4、β-catenin和α-SMA蛋白的表達，Real time PCR檢測腎組織Wnt4、β-catenin和α-SMA mRNA的表達水平。
　　結果:
　　1.體重及KW/BW變化:與SOR組相比，其余各組大鼠各時間點體重均減輕，而KW/BW升高（P＜0.05）;與UUO組相比，腎纖康組和洛汀新

4、組體重各時間點均明顯升高，KW/BW在第7天和14天明顯降低(P＜0.05)，而在第21天較UUO組升高(P＜0.05);腎纖康組和洛汀新組治療效果相當（P＞0.05）。
　　2.24小時尿蛋白定量:每組大鼠各時間點24小時尿蛋白定量組內比較和組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　3.腎功能指標:與SOR組相比，其余各組大鼠各時間點Scr和BUN均有不同程度升高(P＜0.05);與UUO組相比，腎纖康組和洛汀新組

5、Scr和BUN水平均明顯降低（P＜0.05）;腎纖康組與洛汀新組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　4.腎臟病理變化:HE和Masson染色顯示，SOR組各時間點腎小球和腎小管形態(tài)正常，未見腎纖維化病理改變;其余各組腎皮質逐漸變薄，可見不同程度腎小管管腔萎縮或閉塞、上皮細胞空泡變性和炎性細胞浸潤，間質中藍染膠原纖維逐漸增多，21天達到高峰;與SOR組相比，其余各組大鼠各時間點腎小管間質損傷指數(shù)和膠原染色陽性面積均明顯增加(

6、P＜0.05)，與UUO組相比，腎纖康組和洛汀新組各時間點腎小管間質損傷指數(shù)和膠原染色陽性面積均明顯降低(P＜0.05)，腎纖康組與洛汀新組相比差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　5.免疫組織化學染色檢查
　　5.1α-SMA: SOR組中α-SMA僅在腎小球血管平滑肌細胞上少量表達，各時間點表達無變化，其余各組大鼠UUO術后腎小管上皮細胞及間質細胞中可見陽性表達，隨著梗阻時間延長表達逐漸增加(P＜0.05);與UUO

7、組相比，腎纖康組和洛汀新組各時間點表達明顯減少(P＜0.05);腎纖康組和洛汀新組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　5.2β-catenin和Wnt4:β-catenin和Wnt4在SOR組腎小管上皮細胞基底側少量表達，隨著時間延長表達均無明顯變化，其余各組大鼠UUO術后在腎小管上皮細胞內的表達逐漸增加（P＜0.05）;與UUO組相比，腎纖康組和洛汀新組各時間點表達明顯減少（P＜0.05）;腎纖康組和洛汀新組比較差異無統(tǒng)

8、計學意義(P＞0.05)。
　　5.3相關性分析:UUO組腎組織β-catenin和Wnt4分別與α-SMA表呈正相關（r分別為0.982，0.934;P均＜0.05）。
　　6.Western blot檢測
　　Wnt4、α-SMA、β-catenin蛋白在SOR組大鼠腎臟中表達較低，而在UUO組中隨著梗阻時間延長表達逐漸增加(P＜0.05);與UUO組相比，腎纖康組和洛汀新組中上述蛋白表達均明顯下降(P＜0.05)

9、，腎纖康組和洛汀新組表達量差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　7.Real time PCR檢測
　　Wnt4、α-SMA、β-catenin mRNA在SOR組有少量表達，UUO術后表達逐漸增高，21天達到最高;與SOR組相比，其余各組均明顯升高(P＜0.05)，與UUO組相比，腎纖康組和洛汀新組腎組織中Wnt4、α-SMA、β-catenin mRNA量均明顯下降(P＜0.05)，腎纖康組和洛汀新組表達量差異無統(tǒng)計學

10、意義(P＞0.05)。
　　結論:
　　1.腎纖康顆?？梢越档蚒UO大鼠Scr、BUN、腎小管間質損傷指數(shù)及腎間質膠原纖維面積，作用效果與苯那普利相當。
　　2.Wnt/β-catenin信號通路在UUO大鼠模型中活性增強，其關鍵信號蛋白β-catenin和Wnt4的表達與腎纖維化程度呈正相關。
　　3.腎纖康顆?？赡芡ㄟ^抑制Wnt/β-catenin信號通路而減少α-SMA及膠原纖維的表達，延緩UUO大鼠腎間質