六月青皂苷抗肝纖維化作用及其分子機制的實驗研究.pdf

1、第一部分六月青皂苷的提取及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　 目的：建立六月青中六月青皂苷含量的測定方法，并提取六月青皂苷。方法：采用60％乙醇提取、石油醚去除脂溶性成分、水飽和正丁醇萃取法提取六月青皂苷。以人參皂苷Re為標(biāo)準(zhǔn)品，香草醛-冰醋酸-高氯酸法測定六月青皂苷的含量。結(jié)果：精密度和穩(wěn)定性RSD值分別為1.35％和1.25％，；平均加樣回收率為100.42％；六月青皂苷的平均得率為4.57％，純度為46.06％。結(jié)論：此法簡便、準(zhǔn)確，精密

2、度、穩(wěn)定性好，可用于六月青皂苷的測定。六月青皂苷的得率和純度良好。
　　 第二部分體內(nèi)實驗六月青皂苷抗大鼠肝纖維化作用及其機制的研究
　　 目的：研究六月青皂苷(LYQS)對四氯化碳(Carbontetra-Chloride,CCl4)所致大鼠肝纖維化的治療作用，并探討其作用機制。
　　 方法：Wistar大鼠隨機分成兩組，模型組大鼠采用50％CCl4花生油溶液灌胃造模，共七周，正常組用生理鹽水代替。將病理檢查確

3、認(rèn)肝纖維化形成的Wistar大鼠50只，隨機分成5組，分別給予相應(yīng)藥物進行干預(yù)，每日1次，連續(xù)4周。末次給藥24小時后處死大鼠。
　　 (1)采集血清及肝組織，檢測大鼠血清中ALT、AST，肝組織中Hyp、SOD、MDA和GSH-PX的含量。
　　 (2)于肝左葉同一部位取肝組織約1×1×1cm3大小，固定于10％中性福爾馬林溶液，做光鏡觀察。
　　 (3)以RT-PCR法檢測肝組織中Col-I、MMP-2、TI

4、MP-1、TIMP-2、TGF-β1mRNA的表達。
　　 結(jié)果：
　　 (1)與模型組比較，各劑量的六月青皂苷及陽性藥能顯著降低大鼠血清中CCl4所致異常升高的ALT(P＜0.01)；高、中劑量六月青皂苷及陽性藥可降低大鼠血清中CCl4所致異常升高的AST(P＜0.01)；同時，各劑量的六月青皂苷能顯著提高肝組織中異常降低的SOD、GSH-PX含量(P＜0.05或P＜0.01)，并顯著降低異常升高的Hyp、MDA含量(

5、P＜0.05或P＜0.01)。
　　 (2)HE染色病理結(jié)果顯示，與模型組比較，六月青皂苷高、中劑量及陽性組大鼠肝臟纖維化程度明顯減輕(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 (3)陽性藥及LYQS各劑量組均可不同程度地下調(diào)Col-I、TIMP-1、TIMP-2mRNA的表達，陽性藥及六月青高、中劑量組可顯著下調(diào)TGF-β1mRNA的表達，并可上調(diào)MMP-2mRNA的表達(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 結(jié)論

6、：六月青皂苷對大鼠化學(xué)性肝損傷具有一定程度的治療作用，其機制可能與其清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，同時抑制膠原合成與沉積，減少細胞外基質(zhì)(ECM)的沉積和促進ECM的降解，有一定的關(guān)系。
　　 第三部分體外實驗六月青皂苷對肝星狀細胞的影響
　　 目的：研究六月青皂苷對HSC-T6增殖、毒性和抑制纖維合成的影響，探討其抗肝纖維化的作用機制。方法：體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)，MTT法檢測六月青皂苷對HSC-T6的抑

7、制作用。以大于90％存活率的3種濃度的六月青皂苷對HSC-T6進行干預(yù)，乳酸脫氫酶法檢測六月青對HSC-T6的毒性，羥脯氨酸(Hyp)測試盒測定細胞上清液中Hyp含量，RT-PCR法測定其對Col-I、TGF-β1、MMP-2、TIMP-1及TIMP-2mRNA表達的影響。結(jié)果：LYQS可顯著抑制HSC-T6的增殖，且毒性較低；LYQS各濃度可顯著降低細胞上清液中Hyp含量(P＜0.05或P＜0.01)；LYQS各濃度組可顯著下調(diào)細胞T