線粒體基因組D-Loop區(qū)基因多態(tài)與男性O(shè)SAHS患者的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 1.分析OSAHS人群線粒體DNA（mtDNA）D-Loop區(qū)基因和劍橋標(biāo)準(zhǔn)序列之間的差異，并篩查與OSAHS相關(guān)的突變位點(diǎn)。 2.探討mtDNA D-Loop區(qū)基因變異與OSAHS主要臨床指標(biāo)及并發(fā)癥的相關(guān)性，為OSAHS的發(fā)生發(fā)展提供預(yù)報(bào)。 方法： 1.標(biāo)本的選取隨機(jī)選取60例經(jīng)PSG監(jiān)測(cè)診斷為OSAHS的男性患者，按照PSG監(jiān)測(cè)結(jié)果，分為輕，中，重三組。同時(shí)選取102名正常成作為對(duì)照。以上兩

2、者均需排除糖代謝及內(nèi)分泌紊亂的相關(guān)疾病，同時(shí)還需排除慢性阻塞性肺疾病，心功能不全，黃疸及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。兩組年齡需匹配（P<0.05）。同時(shí)采集各研究對(duì)象的個(gè)人相關(guān)信息。 2.標(biāo)本處理清晨空腹時(shí)抽取研究對(duì)象的外周靜脈血2-3ML，EDTA-K2抗凝，保存于-20℃待用。同時(shí)測(cè)量外周血中血糖，總膽固醇，甘油三酯，高密度脂蛋白，低密度脂蛋白含量。 3.mtDNA提取首先從外周血中提取人類基因組DNA后，在DNA中分別加入兩

3、對(duì)引物及PCR試劑后上PCR儀。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳明確目的條帶是否擴(kuò)增出。PCR產(chǎn)物再次經(jīng)過純化處理，最后經(jīng)過瓊脂糖電泳判斷純化產(chǎn)物濃度。 4.標(biāo)本測(cè)序純化產(chǎn)物上CEQ8800遺傳分析系統(tǒng)（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）進(jìn)行雙向測(cè)序，測(cè)序結(jié)果用DNASTAR軟件包中的Seqman進(jìn)行序列分析，用其中的MegAlign進(jìn)行與標(biāo)準(zhǔn)序列的比對(duì)，查找突變位點(diǎn)。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件。計(jì)量資料以X±S表示

4、呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，組間比較采用t檢驗(yàn)或x2檢驗(yàn)，臨床資料等獨(dú)立變量進(jìn)行多元Logistic回歸分析，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)水平為雙側(cè)0.05。 結(jié)果： 1. OSAHS組和正常對(duì)照組的mtDNA D-Loop區(qū)基因片段與標(biāo)準(zhǔn)劍橋序列比對(duì)，在兩組的每個(gè)樣本中均發(fā)現(xiàn)mtDNA D-Loop區(qū)有變異位點(diǎn)存在，共發(fā)現(xiàn)存在有178個(gè)變異位點(diǎn)，其中在60例OSAHS組中有75個(gè)變異位點(diǎn)，102例正常對(duì)照組有103個(gè)變異位點(diǎn)存在；其中發(fā)現(xiàn)在兩組中均

5、同時(shí)存在的變異位點(diǎn)有115個(gè)，而其余的63個(gè)變異位點(diǎn)為兩組中非共有的變異位點(diǎn)，有27個(gè)變異位點(diǎn)僅存在于OSAHS組中，有36個(gè)變異位點(diǎn)僅存在于正常對(duì)照組，其變異發(fā)生率低。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以上所有單個(gè)變異位點(diǎn)在OSAHS組與正常對(duì)照組間的分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；但在兩組非共有的變異位點(diǎn)中，OSAHS組與正常對(duì)照組間存在著顯著性差異（P<0.05），OSAHS發(fā)生變異的位點(diǎn)明顯多于正常對(duì)照組。以上各突變?cè)贠SAHS組的輕，中，重三

6、組間無明顯差異。（P>0.05）. 2.在所有的變異位點(diǎn)中發(fā)現(xiàn)：變異率大于10%的高變異位點(diǎn)在OSAHS組中有21個(gè)，在正常對(duì)照組有24個(gè)位點(diǎn)，其中np73A-G在OSAHS組及對(duì)照組中變異率分別達(dá)到93.7%和84.2%，np263A-G在OSAHS組及對(duì)照組中的變異率分別達(dá)到90.4%和79.3%，np16223C-T在OSAHS組及對(duì)照組中的變異率分別達(dá)到50.1%和47.0%，np16189T-C在OSAHS組及對(duì)照組中

7、的變異率分別達(dá)到46.7%和29%，np16519T-C在OSAHS組及對(duì)照組中變異率分別達(dá)到53.3%和46% 3.發(fā)現(xiàn)np303～315（稱D310區(qū)）區(qū)域?yàn)楦叨茸儺悈^(qū)，并在該段區(qū)域存在多種變異形式. 4.OSAHS組有無基因突變的臨床資料比較，結(jié)果表明兩組之間頸圍，甘油三酯，低密度脂蛋白的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）. 5.OSAHS組發(fā)生線粒體基因突變的患者臨床特征我們對(duì)其部分獨(dú)立變量進(jìn)行了Logis

8、tic回歸分析，結(jié)果表明LDL-C是基因突變的相關(guān)因素。 結(jié)論： 1.OSAHS患者的mtDNA D-Loop基因區(qū)域存在大量變異位點(diǎn)，多為多態(tài)性現(xiàn)象 2.mtDNA變異位點(diǎn)可能與OSAHS患者的臨床表現(xiàn)及并發(fā)癥有密切聯(lián)系，需要增大樣本量和增加樣本類型來進(jìn)一步證實(shí)。 3. OSAHS的臨床癥狀復(fù)雜，攜帶有不同變異患者的臨床表現(xiàn)各不相同，即使攜帶有同一變異因個(gè)體不同而臨床表現(xiàn)差異很大。 4.對(duì)于OS