c-fos和MMP-9在子宮內膜異位癥發(fā)病中的作用研究.pdf

1、研究背景:子宮內膜異位癥是一種主要發(fā)生在育齡期婦女的常見婦科疾病，它表現出來的盆腔疼痛和不孕等臨床癥狀已經嚴重影響了現代女性的身心健康，因此近年來日益受到眾多研究者的廣泛關注。子宮內膜異位癥在普通人群中的發(fā)病率為10％-15％。目前其確切的病因和病理機制仍不清楚，但經典的病因學說有內膜種植學說、體腔上皮化生學說、淋巴回流學說、免疫學說等，近年來認為遺傳因素、環(huán)境因素也同樣影響了子宮內膜異位癥的易感性。子宮內膜異位癥雖是一種良性疾病，但卻

2、表現出與惡性腫瘤相似的生物學特性，如細胞的非典型性增生、浸潤、轉移、新生血管形成及遺傳的不穩(wěn)定性等。其中，子宮內膜的異位侵襲是內異癥的重要特點?？梢酝普?，一些在腫瘤浸潤轉移中發(fā)揮重要作用的分子可能在子宮內膜的異位侵襲中也有著相似的作用。在過去幾年中，有研究探討了金屬基質蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)等腫瘤侵襲促進因子在內異癥發(fā)病中的作用，這些研究常著重于MMPs等降解細胞外基質的效應分子，而這些分

3、子的上游水平存在哪些調控因子，及其與這些因子相互作用的研究卻比較少見。 c-fos是一種雌激素即刻早期基因，可對雌激素作用發(fā)生早期應答。近年有研究證實c-fos可通過調節(jié)MMPs的表達促進腫瘤細胞的浸潤。MMP-9是降解細胞外基質的重要酶類，它不僅促進腫瘤浸潤轉移過程，同時在內異癥的發(fā)病中也發(fā)揮了重要作用。值得一提的是，在MMP-9基因啟動子上游存在轉錄因子AP-1的結合位點，提示作為轉錄因子AP-1重要構成亞單位的c—fos蛋

4、白可參與調節(jié)MMP-9基因的表達，從而促進細胞的浸潤轉移。已有研究顯示c-fos通過調節(jié)MMP-9表達水平而促進腫瘤細胞侵襲。正因為子宮內膜異位癥與腫瘤有著諸多的相似之處，我們設想，c-fos和MMP-9是否在子宮內膜異位癥發(fā)病中有著類似的作用呢? 目前國內外尚未有研究探討c-fos基因在人子宮內膜異位癥發(fā)病中的作用，該研究在國際上首次于人類體內及體外實驗中探討了c-fos在內異癥發(fā)生發(fā)展中的作用，并首次將c-fos與細胞外基質降解因子

5、MMP-9及異位子宮內膜賴以生存的雌激素聯系起來，從疾病誘因到信號整合分子再到效應分子的整體角度分析了三者在子宮內膜細胞侵襲中的作用。同時，該研究在國內首先將Boyden侵襲小室應用于子宮內膜細胞侵襲的研究，為探討內異癥的發(fā)病機理提供了新的方法和途徑。我們首先檢測了c-fos及MMP-9蛋白在正常子宮內膜以及內異癥患者在位和異位內膜組織中的表達，分析c-fos蛋白表達與MMP-9蛋白表達及患者血清雌激素水平的相關性，然后在體外實驗中研究

6、了雌激素、c-fos及MMP-9在子宮內膜細胞侵襲中的作用以及它們之間的相互關系，以期探討子宮內膜異位癥的病理發(fā)生機制并試圖找到一種治療子宮內膜異位癥的新途徑。 第一部分c-fos、MMP-9在子宮內膜異位癥患者在位和異位子宮內膜以及正常人子宮內膜組織中的表達 目的：通過檢測c-fos、MMP-9在子宮內膜異位癥患者及正常人子宮內膜組織中的表達，分析它們之間以及和血清雌激素水平的相關性，探討c-fos、MMP-9在子宮內

7、膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用。 材料與方法：收集子宮內膜異位癥患者(以下簡稱內異癥)配對在位及異位內膜25例(增生期14例、分泌期11例)，正常人子宮內膜30例(增生期17例、分泌期13例)，同時獲取患者血清。采用免疫組織化學法對c-fos蛋白表達定位，蛋白免疫印跡(Western blotting)檢測上述三組子宮內膜組織中c-fos及MMP-9蛋白表達水平，電化學發(fā)光免疫測血清雌二醇水平。 結果：c-fos蛋白主要定位于

8、子宮內膜細胞核；相對于正常人子宮內膜，c-fos及MMP-9在內異癥患者在位及異位內膜的蛋白水平較高：而它們在內異癥患者在位及異位內膜之間的表達水平沒有顯著差異；三組內膜組織都顯示c-fos表達在增生期高于分泌期，僅正常內膜顯示MMP-9蛋白表達增生期高于分泌期；c-fos與MMP-9蛋白表達呈正相關，并且增生期正常人內膜及異位癥患者在位內膜c-fos表達與血清雌二醇水平呈正相關。結論：c-fos及MMP-9在內異癥患者在位和異位內膜組

9、織的異常表達可能參與了子宮內膜異位癥的病理發(fā)生與發(fā)展。 第二部分 Boyden侵襲小室在子宮內膜細胞侵襲研究中的作用 目的：探討B(tài)oyden侵襲小室在子宮內膜細胞侵襲研究中的作用。 材料與方法：收集非內異癥良性疾病行子宮切除的患者子宮內膜，分離培養(yǎng)子宮內膜基質細胞。Boyden侵襲小室觀察雌激素及其受體阻斷劑對子宮內膜基質細胞侵襲力的作用。 結果：各組細胞都發(fā)生侵襲。雌激素作用組子宮內膜基質細胞侵襲數目較

10、對照組增多，而雌激素受體阻斷劑或與雌激素共同作用組細胞侵襲數目與對照組無顯著差異。 結論：Boyden侵襲小室實驗與內異癥雌激素依賴性的臨床表現及子宮內膜基質細胞上存在雌激素受體的基礎研究一致，提示它是研究子宮內膜細胞侵襲現象的有力模型，為探索子宮內膜異位癥發(fā)病機制提供新的方法和途徑。 第三部分 c-fos;MMP-9在雌激素促進子宮內膜細胞侵襲中的作用 目的：探討c-fos、MMP-9在雌激素促進子宮內膜細胞侵

11、襲中的作用材料與方法：收集非內異癥良性疾病行子宮切除的患者子宮內膜，分離培養(yǎng)子宮內膜基質細胞；觀察雌激素及其受體阻斷劑對基質細胞c-fos、MMP-9蛋白表達水平的影響；采用siRNA分別干擾基質細胞c-fos、MMP-9的表達，結合Boyden侵襲小室觀察c-fos、MMP-9基因沉默的基質細胞在雌激素作用下侵襲力的改變，同時觀察c-fos基因沉默基質細胞在雌激素作用下MMP-9蛋白表達水平的改變。結果：①雌激素作用于子宮內膜基質細胞

12、使c-fos、MMP-9表達水平上升，但雌激素受體阻斷劑可抑制此現象；②對照組、雌激素組、雌激素作用的siRNA干擾組細胞均發(fā)生侵襲，雌激素作用組細胞侵襲數目最多，c-fos或MMP-9siRNA干擾的細胞在雌激素作用下侵襲數目較雌激素組減少，但仍多于對照組；③c-fos siRNA干擾的細胞在雌激素作用下MMP-9蛋白表達水平較對照組無顯著差異。 結論：①雌激素以受體依賴性方式作用于c-fos，繼而引發(fā)MMP-9基因表達增強，