沙棘籽原花色素的研究.pdf

1、沙棘(Hippophae)，是一種兼具生態(tài)效益和經濟效益的優(yōu)良樹種。我國現(xiàn)有沙棘林約130萬公頃，沙棘籽年產量26.3萬噸。沙棘籽主要用于提取沙棘油；近期，沙棘籽中的原花色素化合物越來越為人們所關注。原花色素具有清除自由基、抗腫瘤、抗高血壓等多種生理活性。本文系統(tǒng)研究了沙棘籽原花色素的基本組成、總量測定方法、清除自由基和抗氧化活性，并對沙棘籽原花色素化合物進行了分離純化和結構鑒定。 采用多種溶劑體系提取沙棘籽中的抗氧化活性成分，

2、分析了提取物中的酚類組成；采用Cu2+誘導的卵磷脂脂質體氧化、DPPH·清除和還原力試驗，研究了提取物的抗氧化活性。實驗結果表明：提取物中的原花色素含量遠高于黃酮含量；70％丙酮是提取沙棘籽原花色素適宜的溶劑體系；70％丙酮提取物對Cu2+誘導的卵磷脂脂質體氧化具有較強的抑制作用，同時具有較強的DPPH·清除活力和較強的還原力。沙棘籽不同溶劑提取物的抗卵磷脂脂質體氧化活性、DPPH·清除活力和還原力與原花色素含量之間均有良好的相關性。

3、 利用聚酰胺、ToyopearlHW-40F、SephadexLH-20以及ODS-AQ(C18)柱色譜對沙棘籽中的原花色素化合物進行分離純化，得到6種原花色素類化合物，通過ESI-MASS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT-NMR技術分別鑒定為兒茶素(Ⅰ)、表兒茶素(Ⅱ)、桔兒茶素(Ⅲ)、表桔兒茶素(Ⅳ)、兒茶素-(4α-8)-兒茶素(原花青素B3，Ⅴ)和桔兒茶素-(4α-8)-表兒茶素(Ⅵ)?；衔铫?、Ⅵ為首次從該屬植物

4、中分離得到。 利用HPLC/ESI-MASS技術對兒茶素-(4α-8)-兒茶素的硫解產物進行辯識，比較了三種硫解條件對反應的影響，結果表明：延伸單元的雜環(huán)裂解產物是反應的主要副產物；40℃/30min反應條件下，末端單元和延伸單元的表異構化率顯著低于90℃/2min和60℃/30min，硫解產率顯著高于90℃/2min和60℃/30min，為適宜的硫解條件。 利用SephadexLH-20柱色譜分離沙棘籽原花色素單體、寡

5、聚體和多聚體組分。采用HPLC/ESI-MASS技術分析了單體和寡聚體組分，共檢測到4種單體和8種二聚體。4種單體分別為兒茶素、表兒茶素、桔兒茶素和表桔兒茶素；二聚體包括3種原花青素二聚體、1種原飛燕草素二聚體和4種混合二聚體，并根據(jù)ESI提供的質譜信息，分析了其化學結構。采用SephadexLH-20柱色譜對多聚體組分進行分級分離，并通過硫解確定了多聚體組分和各分級組分的單體組成和平均聚合度。結果表明：兒茶素、表兒茶素、桔兒茶素和表桔

6、兒茶素均出現(xiàn)在分級組分的末端單元和延伸單元；桔兒茶素是構成多聚體各組分末端單元的主要組成成分，桔兒茶素和表桔兒茶素(合并計算)是構成多聚體各組分延伸單元的主要組成成分；多聚體組分的平均聚合度為12.2，原飛燕草素比例為81.2％； 香草醛/硫酸法和正丁醇/鹽酸法是測定原花色素含量的常用方法。系統(tǒng)研究了各種因素對兒茶素、葡萄籽原花青素和沙棘籽原花色素與香草醛反應的靈敏度和穩(wěn)定性的影響。研究結果表明：H2SO4濃度、反應溫度和時間、

7、體系水分含量和香草醛濃度對反應均有影響，且兒茶素、葡萄籽原花青素和沙棘籽原花色素與香草醛反應的動力學有顯著差異。實驗確定以5mol/L硫酸和無水甲醇作為反應介質；兒茶素的適宜反應條件為：30℃反應5min(測定波長為500nm)，葡萄籽原花青素的適宜反應條件為：20℃反應5min(測定波長為500nm)，沙棘籽原花色素的適宜反應條件為：30℃反應15min(測定波長為505nm)。同時，建立了適合沙棘籽原花色素含量快速測定的正丁醇/鹽酸

8、法。以被測樣品中純化的原花色素作為標準物質是準確測定原花色素含量的關鍵。 采用DPPH·、O2-·(魯米諾-鄰苯三酚化學發(fā)光法)、HO·(脫氧核糖降解法)的清除試驗、抗卵磷脂脂質體氧化(AAPH及Cu2+催化)及D-半乳糖擬衰老模型小鼠的抗氧化試驗，研究了沙棘籽原花色素體外和體內的抗氧化活性。結果表明：沙棘籽原花色素對DPPH·、O2-·和HO·具有較強的清除能力；對O2-·(半清除濃度23.95μg/mL)和HO·(反應速率常

9、數(shù)1.355×109L·g-1·s-1)的清除活力顯著高于葡萄籽原花青素。沙棘籽原花色素對AAPH誘導的卵磷脂脂質體氧化的抑制能力強于葡萄籽原花青素。低濃度的沙棘籽原花色素促進Cu2+催化的卵磷脂脂質體氧化，高濃度則抑制Cu2+催化的卵磷脂脂質體氧化。中、高劑量沙棘籽原花色素能顯著抑制D-半乳糖擬衰老模型小鼠肝、腦組織中SOD的活力下降(P＜0.05)。 兒茶素、表兒茶素、桔兒茶素、表桔兒茶素、兒茶素-(4α-8)-兒茶素和桔兒