沙棘籽原花色素的研究.pdf

1、沙棘(Hippophae)，是一種兼具生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益的優(yōu)良樹種。我國(guó)現(xiàn)有沙棘林約130萬(wàn)公頃，沙棘籽年產(chǎn)量26.3萬(wàn)噸。沙棘籽主要用于提取沙棘油；近期，沙棘籽中的原花色素化合物越來(lái)越為人們所關(guān)注。原花色素具有清除自由基、抗腫瘤、抗高血壓等多種生理活性。本文系統(tǒng)研究了沙棘籽原花色素的基本組成、總量測(cè)定方法、清除自由基和抗氧化活性，并對(duì)沙棘籽原花色素化合物進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定。 采用多種溶劑體系提取沙棘籽中的抗氧化活性成分，

2、分析了提取物中的酚類組成；采用Cu2+誘導(dǎo)的卵磷脂脂質(zhì)體氧化、DPPH·清除和還原力試驗(yàn)，研究了提取物的抗氧化活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：提取物中的原花色素含量遠(yuǎn)高于黃酮含量；70％丙酮是提取沙棘籽原花色素適宜的溶劑體系；70％丙酮提取物對(duì)Cu2+誘導(dǎo)的卵磷脂脂質(zhì)體氧化具有較強(qiáng)的抑制作用，同時(shí)具有較強(qiáng)的DPPH·清除活力和較強(qiáng)的還原力。沙棘籽不同溶劑提取物的抗卵磷脂脂質(zhì)體氧化活性、DPPH·清除活力和還原力與原花色素含量之間均有良好的相關(guān)性。

3、 利用聚酰胺、ToyopearlHW-40F、SephadexLH-20以及ODS-AQ(C18)柱色譜對(duì)沙棘籽中的原花色素化合物進(jìn)行分離純化，得到6種原花色素類化合物，通過(guò)ESI-MASS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT-NMR技術(shù)分別鑒定為兒茶素(Ⅰ)、表兒茶素(Ⅱ)、桔兒茶素(Ⅲ)、表桔兒茶素(Ⅳ)、兒茶素-(4α-8)-兒茶素(原花青素B3，Ⅴ)和桔兒茶素-(4α-8)-表兒茶素(Ⅵ)?；衔铫?、Ⅵ為首次從該屬植物

4、中分離得到。 利用HPLC/ESI-MASS技術(shù)對(duì)兒茶素-(4α-8)-兒茶素的硫解產(chǎn)物進(jìn)行辯識(shí)，比較了三種硫解條件對(duì)反應(yīng)的影響，結(jié)果表明：延伸單元的雜環(huán)裂解產(chǎn)物是反應(yīng)的主要副產(chǎn)物；40℃/30min反應(yīng)條件下，末端單元和延伸單元的表異構(gòu)化率顯著低于90℃/2min和60℃/30min，硫解產(chǎn)率顯著高于90℃/2min和60℃/30min，為適宜的硫解條件。 利用SephadexLH-20柱色譜分離沙棘籽原花色素單體、寡

5、聚體和多聚體組分。采用HPLC/ESI-MASS技術(shù)分析了單體和寡聚體組分，共檢測(cè)到4種單體和8種二聚體。4種單體分別為兒茶素、表兒茶素、桔兒茶素和表桔兒茶素；二聚體包括3種原花青素二聚體、1種原飛燕草素二聚體和4種混合二聚體，并根據(jù)ESI提供的質(zhì)譜信息，分析了其化學(xué)結(jié)構(gòu)。采用SephadexLH-20柱色譜對(duì)多聚體組分進(jìn)行分級(jí)分離，并通過(guò)硫解確定了多聚體組分和各分級(jí)組分的單體組成和平均聚合度。結(jié)果表明：兒茶素、表兒茶素、桔兒茶素和表桔

6、兒茶素均出現(xiàn)在分級(jí)組分的末端單元和延伸單元；桔兒茶素是構(gòu)成多聚體各組分末端單元的主要組成成分，桔兒茶素和表桔兒茶素(合并計(jì)算)是構(gòu)成多聚體各組分延伸單元的主要組成成分；多聚體組分的平均聚合度為12.2，原飛燕草素比例為81.2％； 香草醛/硫酸法和正丁醇/鹽酸法是測(cè)定原花色素含量的常用方法。系統(tǒng)研究了各種因素對(duì)兒茶素、葡萄籽原花青素和沙棘籽原花色素與香草醛反應(yīng)的靈敏度和穩(wěn)定性的影響。研究結(jié)果表明：H2SO4濃度、反應(yīng)溫度和時(shí)間、

7、體系水分含量和香草醛濃度對(duì)反應(yīng)均有影響，且兒茶素、葡萄籽原花青素和沙棘籽原花色素與香草醛反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)有顯著差異。實(shí)驗(yàn)確定以5mol/L硫酸和無(wú)水甲醇作為反應(yīng)介質(zhì)；兒茶素的適宜反應(yīng)條件為：30℃反應(yīng)5min(測(cè)定波長(zhǎng)為500nm)，葡萄籽原花青素的適宜反應(yīng)條件為：20℃反應(yīng)5min(測(cè)定波長(zhǎng)為500nm)，沙棘籽原花色素的適宜反應(yīng)條件為：30℃反應(yīng)15min(測(cè)定波長(zhǎng)為505nm)。同時(shí)，建立了適合沙棘籽原花色素含量快速測(cè)定的正丁醇/鹽酸

8、法。以被測(cè)樣品中純化的原花色素作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是準(zhǔn)確測(cè)定原花色素含量的關(guān)鍵。 采用DPPH·、O2-·(魯米諾-鄰苯三酚化學(xué)發(fā)光法)、HO·(脫氧核糖降解法)的清除試驗(yàn)、抗卵磷脂脂質(zhì)體氧化(AAPH及Cu2+催化)及D-半乳糖擬衰老模型小鼠的抗氧化試驗(yàn)，研究了沙棘籽原花色素體外和體內(nèi)的抗氧化活性。結(jié)果表明：沙棘籽原花色素對(duì)DPPH·、O2-·和HO·具有較強(qiáng)的清除能力；對(duì)O2-·(半清除濃度23.95μg/mL)和HO·(反應(yīng)速率常

9、數(shù)1.355×109L·g-1·s-1)的清除活力顯著高于葡萄籽原花青素。沙棘籽原花色素對(duì)AAPH誘導(dǎo)的卵磷脂脂質(zhì)體氧化的抑制能力強(qiáng)于葡萄籽原花青素。低濃度的沙棘籽原花色素促進(jìn)Cu2+催化的卵磷脂脂質(zhì)體氧化，高濃度則抑制Cu2+催化的卵磷脂脂質(zhì)體氧化。中、高劑量沙棘籽原花色素能顯著抑制D-半乳糖擬衰老模型小鼠肝、腦組織中SOD的活力下降(P＜0.05)。 兒茶素、表兒茶素、桔兒茶素、表桔兒茶素、兒茶素-(4α-8)-兒茶素和桔兒