年齡相關(guān)性黃斑變性的遺傳標(biāo)記物和環(huán)境因素的易感性評(píng)估.pdf

1、第一章、LOC387715/HTRA1區(qū)域與晚期AMD的關(guān)聯(lián)性分析
　　 目的:探討染色體10q26上LOC387715/HTRA1區(qū)域的2個(gè)單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)與晚期年齡相關(guān)性黃斑變性(Age-related Macular Degeneration，AMD)的關(guān)聯(lián)性，為晚期AMD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型的建立奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.以1844名

2、高加索人群作為研究對(duì)象，包括1335名晚期AMD患者和509名種族、年齡相匹配的對(duì)照組人群，采集血樣并提取DNA。
　　 2.選取染色體10q26上LOC387715/HTRA1區(qū)域的SNPrs10490924和rs11200638，通過(guò)單核苷酸引物延伸法對(duì)晚期AMD患者和對(duì)照組人群進(jìn)行基因分型。
　　 3.采用卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)，分析2個(gè)SNP與晚期AMD的關(guān)聯(lián)性。
　　 結(jié)果:
　　 1.

3、SNP rs10490924和rs11200638在晚期AMD兩種表現(xiàn)型，地圖狀萎縮(Geographic Atrophy，GA，干性AMD)和脈絡(luò)膜新生血管形成(Choroidal Neovascularization，CNV，濕性AMD)，與對(duì)照組基因分型的比較中均有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異(p＜1.0E-17)。
　　 2.SNPrs10490924和rs11200638的次要等位基因T和A，在GA組、CNV組，以及全部晚期A

4、MD組與對(duì)照組比較的比值比(Odds Ratio，OR)和95％可信區(qū)間(Confidence Interval，CI)的下限均大于1。
　　 3.SNPrs10490924和rs11200638在GA和CNV兩種表現(xiàn)型間的比較中沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4.LOC387715/HTRA1區(qū)域上的2個(gè)SNP具有幾乎完全的連鎖不平衡。
　　 結(jié)論:
　　 1.染色體10q26上LOC387715/HTR

5、AI區(qū)域的SNPrs10490924和rs11200638與晚期AMD的2種表現(xiàn)型均具有極其顯著的關(guān)聯(lián)性。
　　 2.SNP rs10490924和rs11200638的次要等位基因T和A，分別是2個(gè)SNP在AMD發(fā)病過(guò)程中的危險(xiǎn)性等位基因。
　　 3.LOC387715/HTRA1區(qū)域是晚期AMD的主要遺傳標(biāo)記物之一。
　　 第二章、CF、C3、CFB和C2基因與晚期AMD的關(guān)聯(lián)性分析
　　 目的:探討

6、補(bǔ)體系統(tǒng)4個(gè)基因CFH、C3、CFB和C2上的6個(gè)SNP與晚期AMD的關(guān)聯(lián)性，為晚期AMD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型的建立奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.以1844名高加索人群作為研究對(duì)象，包括1335名晚期AMD患者和509名種族、年齡相匹配的對(duì)照組人群，采集血樣并提取DNA。
　　 2.選取來(lái)自基因CFH的SNPrs1061170，rs2274700和rs1410996，C3的rs2230199，CFB的rs64115

7、3，以及C2的rs9332739，通過(guò)單核苷酸引物延伸法對(duì)晚期AMD患者和對(duì)照組人群進(jìn)行基因分型。
　　 3.用卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)，分析6個(gè)SNP與AMD的關(guān)聯(lián)性。
　　 結(jié)果:
　　 1.CFHrs1061170,rs2274700和rs1410996,C3 rs2230199,CFB rs641153，以及C2rs9332739在晚期AMD兩種表現(xiàn)型與對(duì)照組基因分型的比較中均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差

8、異(p＜0.05)，其中以CFH3個(gè)SNP的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異最顯著(P值＜1.0E-30)。
　　 2.SNP rs1061170、rs2274700、rs1410996和rs2230199的等位基因C、C、C、G，在GA組、CNV組，以及全部晚期AMD組與對(duì)照組比較的OR值和95％CI的下限均大于1， rs641153和rs9332739的等位基因T和C，在GA組、CNV組，以及全部晚期AMD組與對(duì)照組比較的OR值和95％CI的上限

9、均小于1。
　　 3.除了SNP rs2230199，SNP rs1061170、rs2274700、rs1410996、rs641153和rs9332739在GA與CNV兩種表現(xiàn)型的比較中均沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4.CFH上的3個(gè)SNP具有幾乎完全的連鎖不平衡。
　　 結(jié)論:
　　 1.補(bǔ)體系統(tǒng)4個(gè)基因CFH、C3、CFB和C2上的6個(gè)SNP，CFH rs1061170、CFH rs227470

10、0、CFH rs1410996、C3 rs2230199、CFB rs641153，以及C2 rs9332739，與晚期AMD的2種表現(xiàn)型均具有顯著的關(guān)聯(lián)性。
　　 2.SNPrs1061170、rs2274700、rs1410996和rs2230199在AMD發(fā)病過(guò)程中的危險(xiǎn)性等位基因分別為C、C、C、G，而rs641153和rs9332739的保護(hù)性等位基因分別為T和C。
　　 3.CFH、C3、CFB和C2基因均為

11、晚期AMD的主要遺傳標(biāo)記物，補(bǔ)體系統(tǒng)的替代途徑和經(jīng)典激活途徑很可能是大部分AMD患者發(fā)病過(guò)程中的關(guān)鍵作用途徑。
　　 第三章、多個(gè)AMD遺傳標(biāo)記物和環(huán)境因素的易感性評(píng)估
　　 目的:評(píng)估多個(gè)與晚期AMD相關(guān)的遺傳因素和環(huán)境因素在AMD發(fā)病過(guò)程中的單獨(dú)或聯(lián)合的效應(yīng)，使用這些易感因素構(gòu)建AMD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型。
　　 方法:
　　 1.收集1844名研究對(duì)象的基本個(gè)人信息和環(huán)境影響因素，包括年齡、性別、吸煙狀況和

12、體重指數(shù)(Body Mass Index，BMI)。
　　 2.選取5個(gè)基因上的8個(gè)SNP， LOC387715 rs10490924，HTRA1rs11200638, CFHrs1061170、rs2274700、rs1410996, C3rs2230199,CFBrs641153，以及C2 rs9332739，對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行基因分型。
　　 3.采用多因素非條件logistic回歸，分析所有與AMD相關(guān)的SNP基

13、因分型以及多個(gè)環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)因素單獨(dú)或聯(lián)合作用于AMD的效應(yīng)，構(gòu)建最佳的AMD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型。
　　 結(jié)果:
　　 1.在晚期AMD患者單、雙眼發(fā)病的比較中，CFH的rs2274700和rs1410996與GA組的單雙眼發(fā)病有關(guān)，而LOC387715/HTRA1的rS10490924和rs11200638與CNV組的單雙眼發(fā)病有關(guān)。
　　 2.吸煙狀況與晚期AMD有著獨(dú)立的關(guān)聯(lián)性，曾吸煙者OR=1.80，95％CI=1.

14、32-2.45;現(xiàn)在吸煙者OR=3.71，95％CI=2.02-6.80。BMI在晚期AMD組顯示出臨界的關(guān)聯(lián)性(P=o.093和0.081)，而在CNV組P=0.038和0.03，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。
　　 3.任一SNP基因型與吸煙狀況或BMI均沒有明顯的交互作用。SNP基因型之間的交互作用分析顯示，僅rs1061170-CT×rs10490924-TT以及rs2274700-CT×rs10490924-TG，2組基因

15、型表現(xiàn)出較弱的交互作用，P值分別為0.029和0.027。
　　 4.AMD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型的建立顯示，具有基因型rs2274700-CC、rs2230199-GG、rs10490924-TT的現(xiàn)在吸煙者，其AMD發(fā)病的相對(duì)危險(xiǎn)度約為基因型rs2274700-TT、rs2230199-CC、rs10490924-GG不吸煙者的450倍。
　　 5.ROC曲線顯示在0.73的分割點(diǎn)處，靈敏度和特異度均約為75％，此時(shí)的模型具有

16、78％的精確區(qū)分度。
　　 結(jié)論:
　　 1.CFH基因可能主要參與到晚期AMD GA的發(fā)病過(guò)程，而LOC387715/HTRA1基因主要參與CNV的發(fā)病過(guò)程。
　　 2.吸煙狀況是AMD發(fā)病過(guò)程中的一個(gè)獨(dú)立環(huán)境危險(xiǎn)因素。BMI也是AMD的危險(xiǎn)因素之一，但相較于吸煙狀況，影響明顯較小。
　　 3.吸煙狀況、BMI以及各SNP基因型間均沒有明顯的交互作用。
　　 4.使用年齡、吸煙狀況、以及6個(gè)遺傳

17、標(biāo)記物（CFH rs1061170，CFH rs2274700，C2rs9332739,CFB rs641153, LOC387715/HTRA1 rs10490924,C3rs2230199)基因分型結(jié)果的乘法模型可以構(gòu)建AMD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型，使今后個(gè)體化的AMD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)可能成為現(xiàn)實(shí)。
　　 第四章、HTRA1基因敲除小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)的改變
　　 目的:探討HTRA1基因在小鼠視網(wǎng)膜形成過(guò)程中的作用，分析該基因表達(dá)缺失對(duì)小

18、鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)的影響。
　　 方法:
　　 1.從HTRA1基因敲除小鼠（HTRA1-/-），野生型C57BL/6小鼠(Wild Type，WT)及其后代的組織中提取DNA，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)其進(jìn)行基因分型。
　　 2.將不同年齡組HTRA1-/-小鼠和WT小鼠的眼球摘除，行視網(wǎng)膜鋪片免疫熒光染色，檢測(cè)HTRA1基因表達(dá)缺失時(shí)小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)改變的狀態(tài)和程度。
　　 結(jié)果:HTRA1-/-小鼠視網(wǎng)膜的螺旋狀