林蛙油抗衰老活性成分的研究.pdf

1、為有效應(yīng)用林蛙油的抗衰老活性，本論文用活性追蹤的方法對(duì)林蛙油抗衰老活性成分進(jìn)行研究。 首先優(yōu)化了抗衰老活性測(cè)定的體外脂質(zhì)過(guò)氧化．硫代巴比妥酸比色法，選用昆明白小鼠的5％肝勻漿和約3％的腦勻漿為生測(cè)材料。首次對(duì)影響MDA-TBA反應(yīng)結(jié)果的NaCl濃度和有機(jī)試劑的添加進(jìn)行研究，并討論了有機(jī)試劑在反應(yīng)體系對(duì)林蛙油活性成分所起的作用。得到結(jié)論：硫代巴比妥酸反應(yīng)后生成MDA的量隨體系中NaCl濃度增大而增大，乙醇、丙酮、乙腈在反應(yīng)體系中的

2、添加使MDA生成量增大，并不會(huì)對(duì)抗衰老成分滅活。 比較林蛙油樣品、對(duì)照、空白參比的MDA-TBA反應(yīng)產(chǎn)物溶液的光譜掃描結(jié)果，顯示林蛙油參與反應(yīng)后除在535nm有目標(biāo)峰外，還產(chǎn)生非目標(biāo)峰(450nm)。自行設(shè)計(jì)化學(xué)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)裝置，搭建設(shè)備進(jìn)行實(shí)時(shí)光譜掃描監(jiān)測(cè)，驗(yàn)證產(chǎn)生450nm峰的物質(zhì)與MDA-TBA法測(cè)定林蛙油抗衰老物質(zhì)活性的過(guò)程無(wú)關(guān)，確證了林蛙油的抗衰老活性和用MDA-TBA法測(cè)定林蛙油抗衰老活性的可行性。 分別用液氮

3、研磨、室溫干燥、烘干研磨、燜蒸、離心等方法處理林蛙油樣品，初步得到抗衰老活性物質(zhì)的性質(zhì)：不受低溫、研磨、離心分離的影響，高溫下能夠保持大部分活性。再分別用有機(jī)試劑(石油醚、丙酮)和水溶液(生理鹽水、熱水)提取活性成分，生測(cè)結(jié)果表明活性物質(zhì)有水溶性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好、在截留分子量為8000情況下進(jìn)行透析活性不損失的性質(zhì)，推測(cè)大分子物質(zhì)具活性。用酶解醇沉-Seveg法提取多糖，硫酸銨鹽析得到蛋白。多糖粗提物具有活性，提取得到的純的多糖和蛋白不能

4、獨(dú)立表達(dá)抗衰老活性。 測(cè)定樣品中糖(葸酮-硫酸法)和蛋白質(zhì)的含量(A<,280>法)。測(cè)得林蛙油中糖含量9.16％，蛋白質(zhì)含量47.9％，各種提取樣品中糖和蛋白的濃度與抗衰老活性無(wú)明顯的相關(guān)性。通過(guò)電泳測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的分子量。多糖粗提物中的蛋白大部分為林蛙油樣品中蛋白質(zhì)酶解后的殘鏈，分子量約為6kD、21kD、37kD、56kD、83kD的蛋白質(zhì)未徹底酶解。進(jìn)行電泳后，有活性的提取物比硫酸銨鹽析得到蛋白溶液明顯多三組譜帶，推測(cè)這