中藥巴戟天抗骨質(zhì)疏松活性研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥是一種以全身性骨量減少及骨組織顯微結(jié)構(gòu)改變?yōu)樘卣?并引起骨的脆性增加和骨的強(qiáng)度降低的疾病。它是老年人,尤其是絕經(jīng)后婦女最常見(jiàn)而又最容易被忽視的代謝性骨病。已有研究證明,骨質(zhì)疏松癥在白人及亞洲人群中發(fā)病率高。據(jù)保守估計(jì),該人群中骨質(zhì)疏松患病總風(fēng)險(xiǎn)性為39.3％。比乳腺癌和心血管病的危險(xiǎn)性還高。隨著我國(guó)人口老齡化進(jìn)程的加快,該癥的患病人群正日益龐大。我國(guó)北京、天津、上海和湖南的調(diào)查表明,50歲以上人群中20％的有骨質(zhì)疏松,其中以絕

2、經(jīng)后婦女尤為嚴(yán)重。因而探討其發(fā)病特點(diǎn)和防治對(duì)策具有十分重要的意義。 傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為：“腎主骨,腎虛則骨萎”,補(bǔ)腎中藥已被廣泛用于治療骨質(zhì)疏松,而且近年來(lái)補(bǔ)。腎中藥的治療作用同骨質(zhì)疏松的聯(lián)系成為目前中醫(yī)藥學(xué)研究的熱點(diǎn),所以傳統(tǒng)補(bǔ)腎壯陽(yáng)中藥巴戟天得到我們的關(guān)注。 巴戟天(Morinda officnalis How)為茜草科(Rubitaceae)多年生攀緣木質(zhì)藤本植物,屬亞熱帶雨林植物,為四大南藥之一。肉質(zhì)根供藥用,具有

3、補(bǔ)腎陽(yáng),強(qiáng)筋骨,祛風(fēng)濕的作用。巴戟天始載于《神農(nóng)草經(jīng)》,列為上品,歷代本草都有記載。巴戟天在中醫(yī)藥處方中應(yīng)用廣泛,是重要的中藥材品種之一。 (1)我們應(yīng)用去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松癥模型,從整體動(dòng)物模型角度對(duì)巴戟天總提物的抗骨質(zhì)疏松作用進(jìn)行研究,通過(guò)測(cè)定大鼠脛骨骨礦含量(BMC)和骨密度(BMD),血清無(wú)機(jī)磷(P)、鈣(Ca)、肌酐(Cr)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、堿性磷酸酶(ALP)、脫氧吡啶諾林(DPD)、護(hù)骨素(OPG

4、)、白介素-6(IL-6),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、皮質(zhì)酮(Corticosterone)等指標(biāo),重點(diǎn)考察巴戟天是否能改善去卵巢大鼠的骨質(zhì)疏松狀況,進(jìn)一步探討巴戟天補(bǔ)腎壯骨的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),給服巴戟天提取物的去卵巢大鼠的骨損失能夠得到明顯抑制,同時(shí)不影響體重和子宮的變化。巴戟天提取物的抗骨質(zhì)疏松活性可能與增加血清P,Ca,OPG水平和抑制血清DPD/Cr,TRAP,ACTH水平有關(guān)。 (

5、2)我們還從整體動(dòng)物模型角度深入探討了巴戟天總提物抗骨質(zhì)疏松作用的機(jī)制：因?yàn)楦鶕?jù)報(bào)道巴戟天中葸醌類、甾體類、黃酮類化合物為主要成分,從結(jié)構(gòu)上都類似于植物雌激素類物質(zhì),而體內(nèi)雌技術(shù)激素水平的降低是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生的主要原因。為了明確這些成分在口服給藥途徑上是否通過(guò)雌激素受體途徑發(fā)揮其抗骨質(zhì)疏松的作用,我們用ICR小鼠去卵巢來(lái)培養(yǎng)經(jīng)典的骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。然后將濃度為0.075mg/ml、0.15mg/ml和0.3mg/ml的巴戟天提取物溶

6、液灌胃,每周6次。0.16mg/ml的尼爾雌醇為陽(yáng)性對(duì)照藥,每周1次。4周后取血清,觀察子宮病理切片。綜合觀察巴戟天提取物對(duì)去卵巢性大鼠骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療,從表象上來(lái)看巴戟天具有植物雌激素樣作用的活性相關(guān)。 (3)通過(guò)檢測(cè)巴戟天5個(gè)不同部位(總提物、二氯甲烷部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位和石油醚部位)提取物對(duì)成骨樣細(xì)胞UMR-106增殖和堿性磷酸酶活性的影響,從細(xì)胞水平篩選出巴戟天的活性部位為總提物、二氯甲烷部位、正丁醇部位

7、和石油醚部位,都能顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和ALP的活性,有明顯的抗骨質(zhì)疏松作用。以上研究既是我們進(jìn)一步把巴戟天開(kāi)發(fā)為抗骨質(zhì)疏松藥具的必要前提,也給我們今后的巴戟天抗骨質(zhì)疏松的機(jī)制研究提供了可靠的細(xì)胞水平的依據(jù)。 (4)細(xì)胞水平上的研究主要上是針對(duì)石油醚部位對(duì)成骨細(xì)胞的作用機(jī)制探討：我們利用GC-MS技術(shù)從巴戟天石油醚部位檢測(cè)鑒定出25個(gè)化合物,其中蒽醌類和香豆素類化合物占百分比最大:hexadecanoic acid占20.93％

8、,ethyl hexadecanoate占7.07％,methoxsalen,8-Methoxypsoralen占0.24％,octadeca-9,12-dienoic acid占5.0％,(Z)-octadec-9-enoic acid占10.00％,7-methoxy-8-(3-methylbut-2-enyl)chromen-2-one占41.41％,ethyl octadecarloate占1.48％,2-hydroxy-1-m

9、ethoxy-anthracene-9,10-dione占2.88％。蒽醌類和香豆素類化合物都類似于植物雌激素,因此我們?cè)贛CF-7細(xì)胞(人胸腺癌細(xì)胞)中通過(guò)E-SCREEN法(公認(rèn)的檢測(cè)雌激素路徑法)來(lái)檢測(cè)石油醚部位提取物抗骨質(zhì)疏松的雌激素路徑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)石油醚部位提取物0.03～300 mg/ml濃度都可以顯著刺激MCF-7細(xì)胞的增殖,其中3 mg/ml濃度的增殖作用與1nM的雌二醇作用最接近、最顯著；而且3 mg/ml濃度的石油醚部