利用OPG基因剔除小鼠模型研究抗骨質疏松癥中藥的作用及機制.pdf

1、第一部分利用卵巢切除小鼠模型研究抗骨質疏松癥中藥的作用及機制
　　目的：利用卵巢切除骨質疏松癥小鼠模型，以阿侖膦酸鈉（福善美）為陽性對照，研究中藥仙靈骨葆抗骨質疏松癥的作用及機制。
　　方法：40只2月齡129SV品系雌性小鼠隨機分為四組：卵巢假切+安慰劑組(SHAM+NS，0.2 ml*d-1)；卵巢切除+安慰劑組(OVX+NS，0.2 ml*d-1),卵巢切除+阿侖膦酸鈉組(OVX+ALEN，0.2 m h d—1)，卵

2、巢切除+仙靈骨葆組(OVX+XLGB，500 mg*kg-1*d-1),分別治療8周和12周后處死取材，應用Micro-CT檢測小鼠骨密度(BMD)和骨小梁結構、組織病理切片觀察骨形態(tài)變化、三點彎曲試驗和壓縮試驗檢測小鼠股骨和腰椎骨生物力學指標。ELISA方法測定血清雌二醇含量及OPG和RANKL蛋白表達水平。Real-time PCR方法檢測脛骨OPG和RANKL mRNA的表達水平。
　　結果：Micro-CT檢測股骨B M

3、D，喂藥8周時，OVX+NS組BMD(574.0±21.7 mg/cm2)低于SHAM+NS組8％(622.7±13.7 mg/cm2)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01)，與OVX+NS組相比，OVX+ALEN組（609.8土28.2 mg/cm2)提高6%（P<0.05)，OVX+XLGB組（597.9±27.2 mg/cm2)提高了4%(P>0.05)。喂藥至12周，OVX+NS組BMD(498.6±13.0mg/cm2)較SHAM

4、+NS組(636.5±12.4 mg/cm2)下降22%(P<0.01),與OVX+NS組相比較，OVX+ALEN組BMD(610.6±13.9 mg/cm2)提高了22%(P<0.05)，OVX+XLGB組(561.0土18.6 mg/cm2)提高了13%(P<0.05)。隨著治療時間的不同，OVX+NS組股骨和腰椎骨小梁結構及骨生物力學指標均顯著低于SHAM+NS組(P<0.05)。給予仙靈骨葆和阿侖膦酸鈉治療12周后，骨小梁結構顯

5、著改善（P<0.05)，骨生物力學指標顯著提高（P<0.05)。血清和脛骨OPG和RANKL蛋白水平與OVX+NS組相比明顯增高(P<0.05)，但不增加血清雌二醇水平（P>0.05)。
　　結論：仙靈骨葆能夠顯著提高卵巢切除小鼠的骨密度，改善骨微結構破壞，提高骨生物力學參數(shù)且能夠上調血清和骨組織骨保護素(Osteoprotegerin，OPG)的表達水平。
　　第二部分利用OPG基因剔除小鼠模型研究抗骨質疏松癥中藥的作用及

6、機制
　　目的：利用OPG基因剔除骨質疏松癥模型小鼠，以阿侖膦酸鈉（福善美）為陽性對照，研究仙靈骨葆在抗骨質疏松癥中的療效及作用機制。
　　方法：12只129SV小鼠，40只O T O基因剔除小鼠（雌雄各半），隨機分為四組：野生型小鼠（WT)+安慰劑組(WT+NS，n=12)，OPG基因剔除小鼠（KO)+安慰劑組(KO+NS，n=12)；OPG基因剔除小鼠+阿侖膦酸鈉組(KO+ALEN，0.2 mg.kg-1.d-1，n=1

7、2)；OPG基因剔除小鼠+仙靈骨葆組(KO+XLGB，500 mg.kg-1.d-1，n=16)，持續(xù)治療12周后處死取材，Micro-CT檢測小鼠股骨及腰椎骨密度（BMD)及骨小梁結構，病理切片觀察骨形態(tài)，三點彎曲實驗和壓縮實驗檢測股骨和腰椎骨生物力學指標，ELISA方法測定血清OPG和 RANKL蛋白表達水平，Real-time PCR方法測定脛骨RANKL表達水平。
　　結果：持續(xù)喂藥12周后，KO+NS組B M D(634

8、.35±66.28 mg/cm2)較 WT+NS組(366.69±67.81 mg/cm2)顯著下降42%，骨小梁結構顯著破壞，骨生物力學指標顯著降低；給予仙靈骨葆治療12周后，KO+XLGB組BMD(369.42±36.66 mg/cm2)、骨小梁結構和骨生物力學指標與K O+N S組相比較無顯著變化(P>0.05)。阿侖膦酸鈉皮下注射12周后，KO+ALEN組BMD(616.03±51.31 mg/cm2)與KO+NS組比較提高68

9、%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，骨小梁結構顯著改善（P<0.01)，骨生物力學指標顯著提高（P<0.01)。ELISA檢測血清OPG蛋白表達水平顯示W(wǎng)T組 OPG蛋白水平為2.71±0.25 ng/ml，KO小鼠血清中無OPG蛋白表達。與KO+NS組相比，KO+XLGB組血清和骨組織中RANKL表達水平無顯著變化（P>0.05)，KO+ALEN組RANKL水平顯著增高(P<0.01，P<0.05)。
　　結論：中藥仙靈骨葆在