IMDC負(fù)載P2-,58-73-肽段干預(yù)對(duì)EAN中Th17-Th1細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：觀察Thl7型細(xì)胞因子IL-17、Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγT及Th1型細(xì)胞因子IFN-γ mRNA在P253-78肽段誘導(dǎo)的Lewis大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎(EAN)模型發(fā)病高峰期脾臟、淋巴結(jié)和坐骨神經(jīng)中的表達(dá)，采用負(fù)載P258-73肽段的iMDC(P258-73aa-iMDC)進(jìn)行干預(yù)，研究P258-73aa-iMDC對(duì)Th17/Th1細(xì)胞的影響，探討P2ss-Tsaa-iMDC在誘導(dǎo)EAN抗原特異性的免疫耐受中的

2、相關(guān)機(jī)制。 方法： 1.體外應(yīng)用GM-CSF聯(lián)合IL-10誘導(dǎo)骨髓來(lái)源DC前體細(xì)胞分化和擴(kuò)增，培養(yǎng)第6天收集iMDC，以50μg/ml P258-73肽段負(fù)載于iMDC，獲得負(fù)載P258-73肽段的iMDC(P258-73aa-iMDC)。 2.28只清潔級(jí)Lewis大鼠，隨機(jī)分為佐劑對(duì)照組、致病組、iMDC干預(yù)組和P258-73aa-iMDC干預(yù)組，每組7只。致病組用P253-78和完全弗氏佐劑免疫Lewis大

3、鼠制成EAN動(dòng)物模型。佐劑對(duì)照組只注射完全弗氏佐劑作為致病組的對(duì)照。iMDC干預(yù)組在免疫前皮下注射iMDC。P258-73aa-iMDC干預(yù)組在免疫前皮下注射P258-73aa-iMDC。觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的發(fā)病情況并按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)做EAN嚴(yán)重性的臨床評(píng)估，于發(fā)病高峰期結(jié)束觀察。 3.實(shí)驗(yàn)終止時(shí)以3H-TdR摻入法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。對(duì)坐骨神經(jīng)進(jìn)行病理學(xué)檢查。用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)脾臟、淋巴結(jié)和坐骨神經(jīng)中IL-17、RORγt IFN-

4、γ mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.樹(shù)突狀細(xì)胞的體外培養(yǎng)培養(yǎng)6天的DC，流式細(xì)胞儀表型分析示CD11c+(66.13％±10.81％)、MHC-IIlow(40.03％±7.33％)CD80low(24.72％+4.13％)、和CD86low(18.6l％±3.68％)，證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞是iMDC。 2.動(dòng)物模型： P258-73aa-iMDC干預(yù)組的臨床癥狀較致病組明顯減輕。 與致病組比較，P25

5、8-73aa-iMDC干預(yù)組的抗原特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著降低(P<0.01)。 P258-73aa-iMDC干預(yù)組的坐骨神經(jīng)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和脫髓鞘改變較致病組明顯減輕。 3.IL-17、RORγt和IFNγ mRNA的表達(dá)與佐劑對(duì)照組比較，致病組、iMDC干預(yù)組和P258-73aa-iMDC干預(yù)組的IL-17、IFN-γ mRNA在脾臟、淋巴結(jié)和坐骨神經(jīng)中的表達(dá)均顯著升高(P<0.01)；與致病組比較，P258-73

6、aa-iMDC干預(yù)組顯著降低(P<0.01)。 脾臟和淋巴結(jié)中的RORγt mRNA在各組的表達(dá)差異大致同IL-17和IFN-γ，但坐骨神經(jīng)中，RORγt mRNA幾乎無(wú)表達(dá)。 結(jié)論： 1.IL-17、RORγt和IFN-γ表達(dá)上調(diào)可能促進(jìn)EAN發(fā)病。 2.Th17/Th1細(xì)胞可能協(xié)同誘導(dǎo)EAN的發(fā)生與發(fā)展。 3.P258-73aa-iMDC通過(guò)抗原特異性地抑制Th17/Th1細(xì)胞而減輕EAN的發(fā)