川阿格雷的毒代動(dòng)力學(xué)及藥物暴露對(duì)代謝的影響.pdf

1、川阿格雷是基于傳統(tǒng)中藥機(jī)理，運(yùn)用現(xiàn)代技術(shù)合成的新一代血小板凝集抑制劑。本文的工作旨在對(duì)其毒代動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)相互作用作一整體評(píng)價(jià)，以支持人體藥代動(dòng)力學(xué)研究并為臨床用藥提供參考依據(jù)。
　　 一、生物樣品中川阿格雷分析方法的建立
　　 本文采用液液萃取法處理血漿樣品，建立了以桂皮醛為內(nèi)標(biāo)的反相高效液相色譜-紫外光譜檢測(cè)川阿格雷的體內(nèi)分析方法。色譜分離條件為：色譜柱DiamonsilC18(5μm，100×4.6mm)；流動(dòng)相組成

2、為乙腈、水及用來(lái)調(diào)節(jié)pH的乙酸銨(pH4.4)，流速為1mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm，柱溫30℃。采用本文建立的生物樣品預(yù)處理方法和反相高效液相色譜法分離測(cè)定生物樣品中川阿格雷的含量，生物樣品預(yù)處理方法回收率高，色譜分離選擇性好。本法的準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度、專屬性和定量線性范圍均達(dá)到生物樣品分析的要求，該方法成功用于川阿格雷在Beagle犬與SD大鼠體內(nèi)的毒代動(dòng)力學(xué)研究。
　　 二、肝微粒體中CYP450酶亞型特異性

3、底物及其代謝產(chǎn)物定量分析方法的建立
　　 本文采用液液萃取法處理肝微粒體溫孵樣品，建立了以原兒茶酸、利眠寧和非那西丁為內(nèi)標(biāo)的反相高效液相色譜-紫外光譜檢測(cè)CYP450酶亞型特異性底物及其代謝產(chǎn)物的分析方法。色譜分離條件為：色譜柱迪馬DiamonsilC18(5μm，150×4.6mm)；非那西丁(CYP1A2底物)：流動(dòng)相甲醇(0.1％甲酸)(A)-水(0.1％甲酸)(B)，梯度洗脫0～5min18％A、5～10min18％～6

4、0％A、10～15min60％A，流速1.0mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為247nm，柱溫30℃；咪達(dá)嘩侖(CYP3A4底物)：流動(dòng)相甲醇(A)-水(0.02％甲酸)(B)，梯度洗脫0～11min40％～60％A，流速1.0mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為223nm，柱溫30℃；氯唑沙宗(CYP2E1底物)：流動(dòng)相甲醇(A)-水(B)，梯度洗脫0～10min37％～75％A，流速1.0mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為287nm，柱溫25℃。采用本

5、文建立的樣品預(yù)處理方法和反相高效液相色譜法分離測(cè)定溫孵樣品中特征底物及代謝產(chǎn)物的含量，方法回收率高，色譜分離選擇性好，準(zhǔn)確度、精密度、專屬性和定量線性范圍均達(dá)到生物樣品分析的要求，該方法成功用于川阿格雷對(duì)SD大鼠肝微粒體酶活性影響的研究。
　　 三、川阿格雷在動(dòng)物體內(nèi)的毒代動(dòng)力學(xué)研究
　　 本試驗(yàn)設(shè)計(jì)成年、健康Beagle犬多劑量靜脈注射給藥川阿格雷生理鹽水注射液40、80和160mg/Kg三個(gè)劑量組進(jìn)行毒代動(dòng)力學(xué)研究。

6、選擇18條Beagle犬，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成低、中、高劑量三個(gè)劑量組，每一劑量組6條Beagle犬。每組Beagle犬一周給藥6次(每天給藥1次)，第七天停藥。采用緩慢靜脈推注方式給藥，給藥周期為90天。于給藥前及給藥后第1，43，88天取血，每次取血點(diǎn)分別為給藥后0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0h。用上述建立的HPLC-UV法測(cè)定血漿中川阿格雷的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時(shí)間曲線，采用非房室模型

7、推算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示藥物在低劑量、中劑量長(zhǎng)期靜脈注射給藥時(shí)對(duì)機(jī)體沒(méi)有明顯損傷，在高劑量長(zhǎng)期靜脈注射給藥時(shí)對(duì)機(jī)體存在一定損傷，引起代謝或排泄功能減弱而導(dǎo)致最大血藥濃度(C0)增大。
　　 本試驗(yàn)設(shè)計(jì)健康SD大鼠多劑量腹腔注射給藥川阿格雷生理鹽水注射液80、160和320mg/Kg三個(gè)劑量組進(jìn)行毒代動(dòng)力學(xué)研究。選擇18只SD大鼠，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成低、中、高劑量三個(gè)劑量組，每一劑量組6只SD大鼠。每組SD大鼠一周給藥6

8、次(每天給藥1次)，第七天停藥，采用緩慢腹腔注射方式給藥，給藥周期為90天。于給藥前及給藥后第1，44，91天取血，每次取血點(diǎn)分別為給藥后0.833、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0h。用上述建立的HPLC-UV法測(cè)定血漿中川阿格雷的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時(shí)間曲線，采用非房室模型推算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示藥物在低劑量、中劑量長(zhǎng)期腹腔注射給藥時(shí)對(duì)機(jī)體沒(méi)有明顯損傷，在高劑量長(zhǎng)期腹腔注射給藥時(shí)對(duì)機(jī)體存在一定

9、損傷，引起代謝或排泄功能減弱而導(dǎo)致最大血藥濃度(Cmax)增大。
　　 四、川阿格雷暴露水平影響大鼠肝微粒體代謝酶活性的研究
　　 本試驗(yàn)選擇健康SD大鼠多劑量注射川阿格雷注射液15mg/Kg、80mg/Kg、160mg/Kg、320mg/Kg，進(jìn)行川阿格雷影響大鼠肝微粒體代謝酶活性的研究。選擇36只SD大鼠，雌雄各半，分成對(duì)照組和給藥組，每組6只，給藥組尾靜脈注射給予川阿格雷15mg/Kg，腹腔注射給予川阿格雷80mg

10、/Kg、160mg/Kg、320mg/Kg，每天2次，連續(xù)7天；對(duì)照組給予相同劑量注射用生理鹽水，7天后制備肝微粒體蛋白溫孵探針底物，采用BCA蛋白濃度測(cè)定方法測(cè)定蛋白含量，采用高效液相色譜法測(cè)定CYP1A2，CYP3A4和CYP2E1探針底物的代謝產(chǎn)物含量，評(píng)價(jià)CYP1A2，CYP3A4和CYP2E1的活性。結(jié)果顯示給藥15mg/Kg后，CYP1A2，CYP2E1的活性未受影響，CYP3A4的活性受到抑制；給藥80mg/Kg后，CYP