液體發(fā)酵條件對(duì)蟲草（Cordyceps sinensis）菌絲體有效成分、免疫及抗氧化活性的影響.pdf

1、本研究采用正交實(shí)驗(yàn)方法對(duì)冬蟲夏草CS-1菌株(Cordyceps sinensid cs-1)進(jìn)行了深層液體發(fā)酵，測定了菌絲體生物量，用苯酚-硫酸法、3，5-二硝基水楊酸法以及HPLC法等方法對(duì)菌絲體熱水提取物中胞內(nèi)總糖、還原糖、多糖及尿苷、腺苷和蟲草素等含量進(jìn)行測定，篩選在生物量、胞內(nèi)多糖和核苷產(chǎn)量等指標(biāo)上的優(yōu)化發(fā)酵條件；同時(shí)對(duì)提取物免疫活性、抗氧化及保護(hù)氧化損傷作用等進(jìn)行研究。 CS-1菌株的生物量最佳培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度為1

2、8℃、pH為6.5、發(fā)酵時(shí)間為9天，菌絲體生物量達(dá)到20.395±0.178g/L發(fā)酵醪液。在不同的正交實(shí)驗(yàn)條件下，菌絲體水提物中總糖平均為279.37±43.3mg/g，低于天然蟲草提取物中的總糖(374.08±7.45mg/g)；菌絲體中還原糖平均為40.96±8.85mg/g儋，遠(yuǎn)低于天然蟲草163.81±1.1mg/g。而菌絲體提取物中多糖在192.43～312.90 mg/g范圍內(nèi)，平均為238.39±37.75 mg/g，高

3、于天然蟲草210.27±1.19 mg/g；胞內(nèi)多糖得率最佳培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度為22℃、PH為6.5、發(fā)酵時(shí)間為6天。在發(fā)酵溫度為25℃、pH為7.5、發(fā)酵周期為3天，對(duì)腺苷、尿苷、蟲草素形成有利，菌絲體中腺苷含量達(dá)到2.448 mg/g，是天然冬蟲夏草生藥的5.9倍，并遠(yuǎn)超過藥典規(guī)定的0.010％(0.1 mg/g)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 FRAP法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同發(fā)酵條件下的提取物平均抗氧化活性，可達(dá)天然蟲草水提物活性的84.6％；抗

4、氧化活性最佳的培養(yǎng)條件為25℃、pH為4.5、發(fā)酵時(shí)間為6天。25℃、pH為4.5、發(fā)酵時(shí)間為6天條件下，提取物抗氧化活性最高。以H<,2>O，損傷的PC12為模型，研究發(fā)現(xiàn)不同發(fā)酵條件下的提取物對(duì)H<,2>O<,2>氧化損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)活性與天然蟲草提取物相當(dāng)；保護(hù)氧化損傷活性最佳培養(yǎng)條件為22℃、pH為4.5、發(fā)酵時(shí)間為6天。 中性紅比色法結(jié)果顯示，不同濃度的蟲草菌絲體水提物均能提高小鼠單核巨噬細(xì)胞Raw264.7吞噬

5、中性紅的能力，并有量效關(guān)系。；培養(yǎng)條件為28℃、pH為4.5、發(fā)酵時(shí)間為3天時(shí)，促Raw264.7細(xì)胞吞噬活性最高。 MTT法檢測顯示，菌絲體提取物在0-100μg/ml濃度范圍可顯著刺激小鼠脾細(xì)胞增殖但濃度達(dá)到20μg/ml時(shí)反而抑制增殖。在ConA存在時(shí)，蟲草菌絲體提取物在在50-20μg/ml范圍內(nèi)抑制小鼠脾細(xì)胞增殖。這些結(jié)果表明蟲草菌絲體提取物的免疫調(diào)節(jié)作用是雙向的。 正交直觀分析顯示，脾細(xì)胞增殖活性最佳的發(fā)酵為