人15-羥基前列腺素脫氫酶原核表達(dá)體系的構(gòu)建.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人15羥基前列腺素脫氫酶原核表達(dá)體系的構(gòu)建姓名：馮燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：程牛亮20070508癌旁5cm正常對(duì)照組織顯著減少，其中約1／3患者表達(dá)缺失，表明在大腸癌組織中確實(shí)存在15一PGDH表達(dá)減少甚至缺失現(xiàn)象，且其表達(dá)水平與大腸癌發(fā)病具有相關(guān)性：應(yīng)用基因工程技術(shù)，成功構(gòu)建了pBV22015一PGDH—His6質(zhì)粒表達(dá)載體：SDS—PAGE電泳及western咄lotting鑒

2、定結(jié)果表明，在大腸桿菌DI15I：I中成功表達(dá)出15PGDHHis6融合蛋白，且優(yōu)化條件為pBV22015PGDHHisdDH5d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期時(shí)，42℃溫控誘導(dǎo)表達(dá)6小時(shí)，目的蛋自得到高效表達(dá)，表達(dá)量占菌體總蛋白量的20％，經(jīng)鑒定其表達(dá)形式為包涵體；用Ni2NTA樹脂柱純化后獲得純度高達(dá)95％以上的15PGDHHis6融合蛋白純品，且SDSPAGE顯示為單一區(qū)帶結(jié)論1用免疫組化分析方法，證實(shí)了15PGDH與大腸癌發(fā)病有相關(guān)性；2應(yīng)用基