前列腺素類等藥物對牛眼小梁細胞TIGR蛋白表達的影響.pdf

1、前列腺素類可以抑制睫狀肌細胞內(nèi)TIGR蛋白的表達,這可能是其降壓作用的一個中間環(huán)節(jié).而藥物作用于小梁網(wǎng)降壓的具體機制還有待進一步深入研究.該試驗擬用糖皮質(zhì)激素地塞米松,誘導(dǎo)TIGR蛋白在牛眼小梁網(wǎng)組織的表達,并試驗各種促進小梁網(wǎng)通路房水外流的降眼壓藥物,主要是前列腺素類藥物對該蛋白的作用,為進一步闡述TIGR基因及其編碼產(chǎn)物的功能補充證據(jù),同時也從另一方面完善這類抗青光眼藥物的作用機制.第一部分:合成TIGR抗原性多肽,制備并鑒定TIG

2、R多克隆抗體 根據(jù)文獻報道方法,合成具有較高抗原性、特異性的多肽DKSVLEEEKKRLRQ.用其免疫新西蘭白兔2只,采用多點皮下注射的方法,采集血清來制備多克隆抗體.用Elisa試驗鑒定制備的抗體.第二部分:培養(yǎng)牛眼小梁細胞并傳代 按古亞娟等方法,用DMEM-F12培養(yǎng)基培養(yǎng)原代牛眼小梁細胞并傳代,第3代至第5代細胞用于試驗.第三部分:地塞米松誘導(dǎo)TIGR的表達 將地塞米松(dexamethasone)溶于二甲基亞颯(DMSO)溶液配

3、成儲存液,按不同濃度均勻混入培養(yǎng)基內(nèi)與小梁細胞共孵2周,又以5μM地塞米松作用不同時間誘導(dǎo)TIGR蛋白的表達.第四部分:前列腺素類等藥物對TIGR蛋白表達的影響 取3-5代成熟小梁細胞,分別加入前列腺素類(PGE、PGF2 α、xalatan、lμmigan)和nifedipine等預(yù)孵2個小時,再加入5μM地塞米松(dexamethasone)作用2周時間,用制備的TIGR多克隆抗體,通過細胞免疫熒光組化和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-

4、PCR)方法及Western blotting蛋白免疫印跡方法等檢測TIGR轉(zhuǎn)錄水平及表達水平的變化.結(jié)論:1)地塞米松可以在體外誘導(dǎo)TIGR蛋白在牛眼小梁細胞內(nèi)的表達;TIGR蛋白的表達量具有地塞米松劑量和時間的依賴性;2)前列腺素類包括PGE、PGF2 α、lumigan、xalatan和鈣通道阻滯劑nifedipine對TIGR蛋白在體外牛眼小梁細胞內(nèi)的表達具有抑制作用;3)地塞米松在體外誘導(dǎo)TIGR蛋白的表達同時伴有信號通路蛋白