溶纖酶生產(chǎn)菌株的篩選.pdf

1、溶纖酶是指能夠溶解纖維蛋白的一類物質(zhì)的總稱，微生物是溶纖酶最重要的來源之一。微生物溶纖酶具有溶纖活力高、不易引起出血、半衰期長和可經(jīng)消化道直接吸收等優(yōu)點，被認為是最具開發(fā)潛力、安全、廉價的溶栓藥物之一。本課題從篩選產(chǎn)溶纖酶菌株工作開始，主要完成了以下研究內(nèi)容： 從富含蛋白質(zhì)的環(huán)境中，采集菌種分離材料13份，經(jīng)預(yù)處理、富集培養(yǎng)、平板初篩和搖瓶發(fā)酵初篩、復(fù)篩，最終從一份屠宰場土樣中分離獲得一株產(chǎn)溶纖酶菌株W05，產(chǎn)酶活力達230IU

2、/mL，相當于尿激酶活力870IU/mL；對菌株的初步鑒定結(jié)果表明，該菌株的性狀特征與巨大芽孢桿菌相似。 采用紫外線單獨處理和紫外線-氯化鋰復(fù)合處理對產(chǎn)酶菌株Wo5進行誘變，經(jīng)初篩復(fù)篩獲得一只溶纖酶高產(chǎn)突變株WUL99，產(chǎn)酶活力達370IU/mL，相當于尿激酶活力1083IU/mL，比出發(fā)菌株活力提高了24％； 采用單因素實驗和響應(yīng)面實驗法對突變株WUL99發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，確定的最優(yōu)培養(yǎng)基組成為(g/

3、L)：糖蜜60，豆粉11，酵母膏6.9，硫酸鎂0.9，氯化鈣0.2，磷酸氫二鉀1；確定的最優(yōu)發(fā)酵條件為：初始pH7.2，發(fā)酵溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速180r/min，種子液種齡17h，接種量10％，裝液量30mL/250mL。在最優(yōu)培養(yǎng)基和最優(yōu)發(fā)酵條件下，突變株WIL99產(chǎn)酶活力達到470IU/mL，相當于尿激酶活力1408IU/mL，比優(yōu)化前提高了30％； 研究了突變株WUL99所產(chǎn)溶纖酶的部分酶學性質(zhì)。酶的熱穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明，