單核趨化因子蛋白1基因(mcp-1)及脂質(zhì)運載蛋白2基因(lcn2)對肝癌細胞株BEL-7402的作用.pdf

1、單核趨化因子蛋白1(Monocyte chemoattractant protein1，mcp-1)屬于趨化因子CC亞族成員，能通過與單核類趨化因子受體(CCR2)結(jié)合并誘導淋巴細胞等的激活、分化、發(fā)育等，參與血管再生過程，對腫瘤的抑制起作用；脂質(zhì)運載蛋白-2(lipocalin-2，lcn2)為脂質(zhì)運載蛋白家族，被多種類型的細胞表達，參與多種生理活動，如細胞凋亡、增殖以及分化，免疫炎癥反應(yīng)等。mcp-1和lcn2基因均能通過調(diào)控凋亡相

2、關(guān)基因(如Bax、Bc1-2等)誘導細胞凋亡，且可作為急性。腎臟損傷的生物標記物。為了研究mcp-1和lcn2基因在肝癌細胞BEL-7402中的作用，在本實驗室成功克隆mcp-1和lcn2基因并構(gòu)建其表達載體和干涉載體的基礎(chǔ)上，本文通過采用脂質(zhì)體法將構(gòu)建的表達載體pEGFP-N1-mcp-1、pEGFP-N1-lcn2及其對照pEGFP-N1、干涉載體pGenesil-1.0-mcp-1(255)、pGenesil-1.0-lcn2(2

3、92)及其對照pGenesil-1.0-HK轉(zhuǎn)染肝癌細胞BEL-7402，并用G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆細胞，并進行下列檢測，采用活體觀察和HE染色進行細胞形態(tài)觀察；通過細胞計數(shù)和MTT法進行生長曲線的測定；通過PCNA免疫組化檢測細胞增殖；通過Hoechst33258染色檢測細胞凋亡；通過甲基纖維素成集落率實驗檢測細胞的惡性增殖程度；藥物MTT法檢測細胞的耐藥性。
　　結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-mcp-1的細胞形態(tài)與B

4、EL-7402細胞無明顯變化，但細胞核質(zhì)比變??；生長曲線顯示轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-mcp-1的細胞增殖比轉(zhuǎn)染pEGFP-N1的細胞慢；PCNA檢測顯示mcp-1抑制細胞增殖;Hoechst33258凋亡染色顯示mcp-1不引起細胞凋亡；甲基纖維素成集落率檢測顯示mcp-1能抑制BEL-7402細胞的惡性增殖程度。轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-lcn2的細胞細胞核固縮變小，核仁減少：生曲線顯示轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-lcn2的細胞生長明顯降低；PC

5、NA檢測顯示lcn2明顯抑制細胞增殖；Hoechst33258凋亡染色顯示lcn2能引起細胞凋亡；甲基纖維素成集落率檢測顯示lcn2明顯抑制BEL-7402細胞的惡性增殖程度；藥物MTT檢測則發(fā)現(xiàn)，lcn2基因?qū)Π被嵫苌風-4-氟苯丙氨酸(Fp)和L-4-氯苯丙氨酸(Clp)無明顯的耐藥性。
　　綜上所述，mcp-1基因能抑制肝癌細胞BEL-7402的細胞增殖，降低其惡性增殖程度，但對肝癌細胞BEL-7402的細胞凋亡作用不明