HPV與色素改變性皮膚疾病之間的關(guān)系研究.pdf

1、目的:本課題研究目的是在前人的研究基礎(chǔ)之上,收集脂溢性角化病和色素痣的臨床標本,提取總DNA,應(yīng)用HPV特異型和通用型引物對進行擴增,檢測標本中某些型別HPV DNA的存在與否,制作石蠟切片,應(yīng)用兩種針對HPV L1蛋白的抗體進行免疫熒光試驗,檢測標本中HPV L1蛋白的存在與否,從基因和蛋白兩個水平研究脂溢性角化病和色素痣皮損中HPV的存在情況,及其存在與病損的發(fā)生有無相關(guān)性。
　　方法:(1)收集脂溢性角化病和色素痣石蠟標本,

2、確定其臨床診斷和病理診斷,將同一標本分成兩部分,一部分以4um厚連續(xù)切片,撈片,另外一部分以10um厚連續(xù)切片,5片,裝入1.5ml的EP管中;(2)對所有標本提取總DNA,采用PCR方法檢測HPV病毒基因的存在與否,確定HPV DNA陽性檢出率;(3)對相同的所有標本以本課題組所制備的兔抗HPV L1多克隆抗體及購買的小鼠抗HPV L1單克隆抗體為一抗進行免疫熒光檢查,檢測組織中HPV L1蛋白的存在情況及陽性檢出率;(4)采用統(tǒng)計學(xué)

3、軟件,綜合分析以上實驗結(jié)果,確證脂溢性角化病和色素痣中HPV的存在情況,探討HPV在上述疾病發(fā)病機制中所發(fā)揮的作用。
　　結(jié)果:(1)共收集脂溢性角化病石蠟標本46例,色素痣52例;(2)PCR中,對所有標本提取總DNA后均進行β-globin基因擴增,脂溢性角化病陽性者38例,色素痣陽性者44例,對所有β-globin基因擴增陽性的標本進行HPV16 E6,HPV18 E6擴增后再進行HPV L1通用型引物對MY09/11,GP

4、5+/6+擴增,每個引物擴增重復(fù)兩遍,結(jié)果38例SK中有一例HPV16 DNA弱陽性,檢出率為2.63％,其余標本全部為陰性;(3)脂溢性角化病標本進行免疫熒光檢測,兔抗HPV L1多克隆抗體為一抗時,陽性部位主要在上皮未角化部,陽性者共24例,HPV LI蛋白檢出率為63.16％,鼠抗HPV L1單克隆抗體為一抗時,陽性主要表達在上皮角化層及真皮角化珠內(nèi),陽性者共20例,HPV LI蛋白檢出率為52.63％。色素痣標本進行免疫熒光檢測

5、,兔抗HPV L1多克隆抗體為一抗時,陽性主要表達在上皮未角化部及汗腺內(nèi),陽性者共22例,HPV LI蛋白檢出率為50.00％,鼠抗HPV L1單克隆抗體為一抗時,陽性主要表達在上皮角化層及毛囊內(nèi),陽性者共20例,HPV LI蛋白檢出率為45.45％;(4)統(tǒng)計學(xué)分析顯示,脂溢性角化病和色素痣標本中HPV DNA檢出率與HPV L1蛋白檢出率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:(1)本實驗中脂溢性角化病標本中除HPV16外其他的HPV

6、 DNA的檢出率為零,由于HPVL1通用型引物MY09/11,GP5+/6+擴增型別是有限的,是否有其他型別HPV DNA的存在需要進一步證實,但是HPV LI蛋白的檢出率較高,分析得出HPV尤其是高危型與其發(fā)病機制不相關(guān),某些皮膚型HPV可能在組織中存在。(2)色素痣石蠟標本中基因和蛋白水平的檢測,得出的結(jié)論與脂溢性角化病相似。(3)兩種HPV LI抗體的陽性表達部位的不同,提示抗體的差異,同時顯示皮膚標本中角化層與未角化層均存在HP