大鼠心肺復(fù)蘇后心、腦及凝血系統(tǒng)損傷及銀杏達(dá)莫注射液的干預(yù)作用.pdf

1、目的： 通過觀察大鼠心肺復(fù)蘇(CPR)后血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、腦紅蛋白(NGB)濃度變化，血漿組織因子(TF)、組織因子途徑抑制物(TFPI)濃度變化，海馬CA1區(qū)和皮層HIF-1α、NGB表達(dá)，心肌和大腦組織病理改變，并用銀杏達(dá)莫注射液進(jìn)行干預(yù)，研究大鼠CPR后心、腦及凝血系統(tǒng)的損傷機(jī)制及銀杏達(dá)莫注射液的保護(hù)作用。 方法： 成年雄性Spra

2、gue-Dauley(SD)大鼠160只，隨機(jī)分為對照組、復(fù)蘇組、小劑量(0.8ml/kg)銀杏達(dá)莫組(小劑量組)和大劑量(1.6ml/kg)銀杏達(dá)莫組(大劑量組)，每組再分別按氣管切開后(對照組)或自主循環(huán)恢復(fù)(ROSC)后(其余各組)0.5h、3h、6h、9h和24h分為5個亞組，每亞組8只。建立大鼠窒息型心臟驟停(CA)與CPR模型。各亞組分別于時間點取樣。應(yīng)用免疫抑制法測定血清CK-MB含量；Access免疫化學(xué)發(fā)光分析儀以及其

3、配套試劑定量測定血清cTnI含量；雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸收分析法(ELISA)測定血清HIF-1α、NGB水平，血漿TF、TFPI水平；免疫組化方法測定海馬CA1區(qū)和皮層HIF-1α、NGB表達(dá)；光鏡和電鏡下觀察心肌和大腦組織的病理改變。 結(jié)果： 1.復(fù)蘇組和大、小劑量組大鼠血清CK-MB含量從ROSC后0.5h開始即明顯增高，并持續(xù)升高至9h達(dá)高峰，ROSC后24h有所回落，與對照組比較，各時間點血清CK-MB含量均顯著

4、增高(P＜0.01)；與復(fù)蘇組比較，大、小劑量組從ROSC后3h起血清CK-MB含量顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)；與小劑量組比較，大劑量組血清CK-MB含量在ROSC后0.5h、3h顯著降低(P＜0.01)。 2.復(fù)蘇組和大、小劑量組大鼠血清cTnI含量從ROSC后0.5h開始即明顯升高，并一直持續(xù)升高至24h，與對照組比較，各時間點血清cTnI含量均顯著增高(P＜0.01)；與復(fù)蘇組比較，大、小劑量組血清cTnI含量

5、在ROSC后各時間點均顯著降低(P＜0.01)；與小劑量組相比，大劑量組血清cTnI含量在ROSC后6h、9h、24h均明顯降低(P＜0.05)。 3.對照組血清HIF-1α含量復(fù)蘇后一直維持在較低水平；與對照組比較，復(fù)蘇組和大、小劑量組從ROSC后3h起開始顯著升高，并持續(xù)升高至24h，各時間點復(fù)蘇組均有非常顯著性差異(P＜0.01)；與復(fù)蘇組比較，大、小劑量組血清HIF-1α含量從ROSC后3h開始血清HIF-1α含量顯著降

6、低(P＜0.05或P＜0.01)；與小劑量組比較，大劑量組血清HIF-1α含量在ROSC后3h、6h、9h、24h有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。 4.對照組血清NGB含量復(fù)蘇后一直維持在較低水平；與對照組同時間點比較，復(fù)蘇組和大、小劑量組大鼠ROSC后3h開始血清NGB含量即明顯升高(P＜0.01)，并一直持續(xù)升高至24h；與復(fù)蘇組同時間點比較，小劑量組在ROSC后3h、6h、9h血清NGB含量顯著降低(P＜0.0

7、5或P＜0.01)，大劑量組ROSC后3h、6h、9h和24h血清NGB含量顯著降低(P＜0.01)；與小劑量組同時間點比較，大劑量組在ROSC后血清NGB含量在6h、9h和24h有顯著性差異(P＜0.01)。 5.對照組大鼠血漿TF含量處于較低水平。與對照組比較，復(fù)蘇組和大、小劑量組TF含量從ROSC后0.5h起顯著升高(P＜0.01)，其數(shù)值在9h達(dá)到高峰，24h時有所下降；與復(fù)蘇組比較，小劑量組大鼠血漿TF含量在6h、9h

8、、24h均明顯降低(P＜0.01)；與小劑量組比較，大劑量組大鼠血漿TF含量在6h、9h、24h均明顯降低(P＜0.01)。 與對照組比較，復(fù)蘇組大鼠血漿TFPT含量無顯著差別(P＞0.05)，大、小劑量組大鼠血漿TFFI含量在24h點有所升高(P＜0.05)。 與對照組比較，復(fù)蘇組和小劑量組血漿TFPI/TF比值顯著下降(P＜0.01)，大劑量組血漿TFPI/TF比值在0.5h、3h下降，在6h、9h、24有所升高(P

9、＜0.01)；與復(fù)蘇組比較，大、小劑量組大鼠血漿TFPI/TF比值在6h、9h、24h明顯升高(P＜0.01)；與小劑量組比較，大劑量組大鼠血漿TFPI/TF比值在6h、9h、24h有所升高(P＜0.05)。 6.CPR后24h海馬CA1區(qū)、皮層HIF-1α和NGB表達(dá)就增加，棕褐色的HIF-1α和NGB陽性細(xì)胞顆粒，分布密集且胞漿著色較深。大、小劑量組海馬CA1區(qū)和皮層HIF-1α和NGB表達(dá)較復(fù)蘇組減少。 7.光鏡和

10、電鏡下病理改變： 對照組心肌組織結(jié)構(gòu)基本正常，肌纖維無腫脹，心肌細(xì)胞排列規(guī)整；復(fù)蘇組CPR后見心肌細(xì)胞空泡變性，細(xì)胞溶解，肌纖維橫紋消失及心肌纖維排列紊亂，呈波浪狀改變，并可見大片心肌纖維溶解壞死大、小劑量組24h光鏡和電鏡下顯示肌纖維排列尚規(guī)則和輕度水腫，未見明顯壞死。 對照組錐體神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞均無明顯改變，形態(tài)正常，大小一致，核染色質(zhì)均勻，核仁清楚，無明顯核周空暈，細(xì)胞外組織間隙正常，毛細(xì)血管無擴(kuò)張、充血，海馬C

11、A1區(qū)錐體細(xì)胞結(jié)構(gòu)層次清晰，排列整齊，可見細(xì)胞核大而圓、淡染，核仁明顯；復(fù)蘇組CPR后24h錐體細(xì)胞壞死，數(shù)量明顯減少，膠質(zhì)細(xì)胞周圍間隙擴(kuò)大，空泡樣改變，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，海馬錐體細(xì)胞胞體皺縮，突起減少，細(xì)胞周圍間隙明顯增大，呈空泡狀；大、小劑量組CPR后24h光鏡和電鏡下顯示錐體細(xì)胞腫脹，核周間隙稍擴(kuò)大，未見明顯壞死空泡區(qū)，膠質(zhì)細(xì)胞輕度水腫，細(xì)胞外組織間隙基本正常海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞層結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，胞膜、胞核及核仁清