窒息型大鼠心肺復(fù)蘇后心肌損傷及外源性磷酸肌酸的干預(yù)作用.pdf

1、目的： 通過觀察大鼠心肺復(fù)蘇(CPR)后血流動(dòng)力學(xué)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)的變化，心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、p53的表達(dá)，心肌組織病理改變及外源性磷酸肌酸(CP)干預(yù)的影響，研究大鼠CPR后心肌損傷機(jī)制及外源性CP的保護(hù)作用。 方法： 采用窒息型大鼠心跳驟停(CA)與CPR模型。成年雄性Sprague-Dauley(SD)大鼠48只，隨機(jī)分為對照組(A組)、復(fù)

2、蘇組(B組)、常規(guī)劑量CP早期組(C1組，胸外按壓時(shí)首次給藥CP0.5g/kg，2h后再次給藥1.0g/kg)、常規(guī)劑量CP延期組(C2組，自主循環(huán)恢復(fù)(ROSC)時(shí)首次給藥CP0.5g/kg，2h后再次給藥1.0g/kg)、大劑量CP早期組(D1組，胸外按壓時(shí)首次給藥CP1.0g/kg，2h后再次給藥2.0g/kg)、大劑量CP延期組(D2組，ROSC時(shí)首次給藥CP0.0g/kg，2h后再次給藥2.0g/kg)，每組8只大鼠。測定氣管

3、夾閉前(B、C1、C2、D1、D2組)或氣管切開前(A組)1min、ROSC后(B、C1、C2、D1、D2組)或氣管切開后(A組)0h、0.5h、1h、2h各時(shí)相血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，包括心率(HR)、動(dòng)脈收縮壓、平均動(dòng)脈壓(MAP)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓的最大上升和下降速率(+dp/dtmax、-dp/dtmaX)；檢測ROSC后(B、C1、C2、D1、D2組)或氣管切開后(A組)6h、12h、24h

4、各時(shí)相血清CK-MB、cTnI含量；以脫氧核糖核昔酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminaesdeoxynucleotidyltransferase-mediatednickendlabeling，TUNEL)檢測24h時(shí)相的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)；以熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V聯(lián)合PI染色(Annexin-V/PI)雙參數(shù)技術(shù)用流式細(xì)胞儀定量檢測ROSC后24h時(shí)相的心肌細(xì)胞凋亡率；以免疫組化法檢測24h時(shí)相的心肌細(xì)胞Bel-2、Bax和

5、p53蛋白表達(dá)；光鏡下觀察24h時(shí)相心肌組織病理改變。 結(jié)果： 1.與A組比較，B、C1、C2、D1、D2各組在ROSC后0.5h、1h、2h各時(shí)相HR均明顯減慢(P＜0.01)；在ROSC后0h、0.5h、1h、2h各時(shí)相LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，LVEDP均明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)。與B組比較，C1、D1組在ROSC后0.5h、1h、2h各

6、時(shí)相LVSP均明顯升高(P＜0.05)，C2、D2組ROSC后1h、2h時(shí)相LVSP明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)；D1組在0.5h時(shí)相LVEDP較低(P＜0.05)；C1、C2、D1、D2各組在1h、2h時(shí)相+dp/dtmax均有明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)；D1組在ROSC后0.5h時(shí)相-dp/dtmax較高(P＜0.05)。與C1或C2組比較，D1、D2組在ROSC后1h、2h時(shí)相LVSP均明顯升高(P＜0.01

7、或P＜0.05)；與C2組或D2組比較，D1組在ROSC后0.5h時(shí)相LVEDP較低(P＜0.05)；與D2組比較，C1組在ROSC后0.5h時(shí)相LVEDP較低(P＜0.05)。 2.與A組比較，B、C1、C2、D1、D2各組在ROSC后6h、12h、24h各時(shí)相血清CK-MB、cTnI含量均明顯升高(P＜0.01)；與B組比較，C1、C2、D1、D2各組在ROSC后6h、12h、24h各時(shí)相血清CK-MB(P＜0.05或P＜0

8、.01)和血清cTnI含量(P＜0.01)均明顯降低；與C1或C2組比較，D1、D2組在ROSC后6h、12h、24h各時(shí)相血清CK-MB(P＜0.05或P＜0.01)和cTnI含量(P＜0.01)均明顯降低。 3.與A組比較，B、C1、C2、D1、D2各組心肌細(xì)胞AI、凋亡率及Bax、Bcl-2、p53表達(dá)均明顯增高(P＜0.01)，B、C1、C2各組Bcl-2/Bax值均明顯下降(P＜0.05或P＜0.01)；與B組比較，C

9、1、C2、D1、D2各組心肌細(xì)胞AI、凋亡率及Bax、Bcl-2、p53表達(dá)均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，Bcl-2/Bax值均明顯上升(P＜0.05或P＜0.01)；與C1或C2組比較，D1、D2心肌細(xì)胞AI、凋亡率及Bax、Bcl-2、p53表達(dá)均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，Bcl-2/Bax值均明顯上升(P＜0.05或P＜0.01)。 4.光鏡下A組心肌組織基本正常，肌纖維無腫脹，心肌細(xì)胞排列規(guī)整；

10、B組見心肌細(xì)胞空泡變性，細(xì)胞溶解，肌纖維橫紋消失，肌纖維明顯萎縮、排列紊亂，可見部分心肌纖維壞死、斷裂；C1、C2組均見肌纖維排列不規(guī)整，肌纖維部分萎縮或腫脹，間隙增寬；D1、D2組均見心肌細(xì)胞排列相對規(guī)則，肌纖維萎縮或腫脹不明顯，未見壞死。 結(jié)論： 1.大鼠心肺復(fù)蘇后心肌損傷嚴(yán)重，表現(xiàn)為心肌收縮、舒張功能嚴(yán)重受損，血清CK-MB、cTnI含量增高，心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、p53表達(dá)明顯增加，心肌細(xì)