磷酸肌酸抗失血性休克心肌損傷作用及機制的研究.pdf

1、失血性休克(HS)是指由于急性血液或血漿的大量丟失造成全身有效循環(huán)血量下降，組織灌注不足而導致廣泛的細胞缺氧，細胞代謝和功能紊亂及全身器官代謝功能障礙所引起的臨床綜合癥。它是涉及臨床各科常見的危重病癥，導致患者死亡的重要原因之一。目前主要的治療措施是恢復血壓、調(diào)節(jié)微循環(huán)、恢復重要臟器的血液灌流等，但對急性重度失血性休克的救治效果不是很理想，原因在于失血性休克是一種全身性、多器官系統(tǒng)參與的綜合癥，其病理生理機制還需要不斷補充和完善。在休克

2、發(fā)展過程中，心臟足最容易受影響的器官之一，心功能一旦發(fā)生障礙就會加重微循環(huán)的障礙，形成惡性循環(huán)使得休克難以逆轉(zhuǎn)，到了晚期或重度休克時?？砂l(fā)生心力衰竭，大大增加臨床治療的困難?？梢?，在失血性休克復蘇的過程中，心臟功能和結(jié)構的保護至關重要。目前國內(nèi)外大量研究證實失血性休克對心肌造成損傷的機理是與能量代謝紊亂、線粒體損傷、氧自由基損傷和細胞凋亡等有關，其中最重要最根本的因素是心肌的能量代謝紊亂及線粒體損傷；而其病理生理變化與心肌缺血再灌注損傷

3、有很多相似之處。 隨著對休克病理生理機理研究的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)失血性休克造成的心肌損傷主要是一種能量代謝事件，目前心肌的能量治療正逐漸興起。近年來外源性磷酸肌酸做為合成ATP的直接底物己廣泛應用于臨床。而本實驗采用家兔失血性休克模型，研究外源性磷酸肌酸對失血性休克的影響和其對休克所致心肌組織缺血缺氧性損傷的保護作用及可能的分子學機制，以期為外源性磷酸肌酸應用于臨床治療失血性休克提供可靠的依據(jù)。 一、磷酸肌酸抗失血性休克心肌損傷

4、作用效應的研究 新西蘭大耳白兔16只，隨機分為對照組(N組)和外源性磷酸肌酸治療組(CP組)，每組8只。按照Wigger’s改良法建立失血性休克模型：將動物麻醉之后，分離其右側(cè)股動脈、左側(cè)頸靜脈及右側(cè)頸動脈并插管，以供放血、給藥及連接Biolap2000智能生物信號處理系統(tǒng)持續(xù)監(jiān)測平均動脈壓(MAP)。急性放血至平均動脈壓降至40 mmHg(5.3kPa)并維持此低血壓60min，其后將肝素化的動物自身血液回輸進行復蘇，同時CP

5、組靜脈給與CP治療，對照組給等量鹽水，繼續(xù)觀察120min。于休克前、休克60min和復蘇15min、30min、60min、90min、120min等各個不同時間點檢測平均動脈壓的變化，并于休克前(T0)、休克60min(T1)和復蘇30min(T2)、60min(T3)、120min(T4)時抽血取血清。待實驗結(jié)束后取心臟組織標本進行檢測。 1.血流動力學指標： 1)休克前和休克期各時問點兩組之間血壓無統(tǒng)計學差異。

6、 2)復蘇期，CP治療組在各個時間點的血壓均較對照組要高，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，(-x±s：復蘇15min時：N組57.8±11.8，CP組79.9±9.0；復蘇30min時：N組66.4±11.6，CP組80.2±9.4；復蘇60min時：N組65.5±9.7，CP組80.3±9.1；復蘇90min時：N組64.1±7.8，CP組80.7±6.7；復蘇120min時：N組68.3±8.5，CP組83.0±8.7)提

7、示CP治療組的復蘇效果明顯好于對照組，表明外源性磷酸肌酸具有抗失血性休克的作用。 2.心肌酶學指標： 1)較休克前的基礎值(T0)相比，兩組在休克60min(T1)時血清中的CK值和cTnI值均有所升高，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，(CK值：N組：T0 505±118.02，T1 640.6±130.52；CP組：T0 533.6±93.64，T1 662.4±104.93)(cTnI 值：N組：T0 0.008

8、5±0.0012，T1 0.0298±0.0054；CP組T0 0.0090±0.0014；，T1 0.0278±0.0051)提示休克造成了心肌的損害。而同休克60min(T1)時比較，復蘇期各個時間點(T2、T3、T4)的CK值和cTnI值又有進一步的升高，其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)(CK值： N組：T1 640.6±130.52，T2 1274.4±210.54，T3 1551±248.95，T4 1907.

9、2±128.68；CP組：T1 662.4±104.93，T2 951.8±187.54，T3 1124±214.86，T4 1438.8±370.01)(cTnI值： N組：T1 0.0298±0.0054，T2 0.0782±0.0247，T3 0.1195±0.0332，T4 0.1278±0.0278；CP組：T1 0.0278±0.0051，T2 0.0406±0.0083，T3 0.059±0.0142，T4 0.0638±

10、0.0146)，提示復蘇期時，再灌注可進一步導致心肌損害。 2)與對照組相比，CP治療組在休克前(T0)及休克60min(T1)時的CK值和cTnI值之間差異無統(tǒng)計學意義；而在復蘇期各個時間點(T2、T3、T4)的CK值和cTnI值均明顯減低，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(CK值：T2：N組1274.4±210.54，CP組951.8±187.54；T3：N組1551±248.95，CP組1124±214.86；T4：N組

11、1907.2±128.68，CP組1438.8±370.01)(cTnI值：T2：N組0.0782±0.0247，CP組0.0406±0.0083；T3：N組0.1195±0.0332， CP組0.059±0142；T4:N組0.1278±0.0278， CP組0.0638±0.0146)，說明CP治療組家兔的心肌損傷明顯小于對照組，表明外源性磷酸肌酸具有抗失血性休克所致心肌損傷的作用。 3.病理學觀察： HE染色顯示：

12、對照組家兔的心肌損害明顯，主要表現(xiàn)為心肌纖維結(jié)構紊亂，排列不規(guī)則，部分心肌細胞出現(xiàn)凋亡，甚至溶解、壞死。而CP治療組心肌病理性變化程度較對照組減輕。 二、磷酸肌酸抗失血性休克心肌損傷作用機理的研究 1.心肌組織超微結(jié)構表現(xiàn)： 對照組心肌纖維結(jié)構紊亂，肌絲溶解，細胞膜破壞，細胞器外漏，細胞核畸形；線粒體腫脹，內(nèi)外膜模糊，嵴排列紊亂；還可發(fā)現(xiàn)心肌凋亡細胞。而CP治療組心肌纖維和線粒體損傷程度較對照組低，凋亡細胞少見。

13、 2.心肌線粒體Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性： 實驗結(jié)果表明：較之對照組，CP治療組家兔心肌線粒體中的Na+-K+-ATP酶(N組：2.26±0.50；CP組：3.29±0.12)和Ca2+-ATP酶(N組：0.93±0.12：CP組：1.31±0.17)活力均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。表明外源性磷酸肌酸能夠減輕心肌線粒體損傷。 3.心肌氧化應激指標： 實驗結(jié)果顯示：較

14、之對照組，CP治療組家兔心肌超氧化物歧化酶(SOD)(N組：341.86±23.07；CP組：561.05±50.4.1)活性顯著升高(P<0.01)而丙二醛(MDA)(N組：4.28±0.16；CP組：2.03±0.49)含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提示外源性磷酸肌酸具有抗氧化應激的作用。 4.TUNEL法檢測心肌細胞凋亡： 結(jié)果顯示：對照組家兔心肌可見多量的TUNEL陽性凋亡細胞；CP治療組心肌