感毒清顆粒對(duì)免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)和臨床研究.pdf

1、第一部分、感毒清顆粒對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:為了探討感毒清顆粒對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，本研究通過(guò)建立免疫抑制小鼠模型，觀察感毒清顆粒對(duì)免疫抑制小鼠免疫器官臟器指數(shù)和免疫細(xì)胞、免疫分子含量等方面的影響，并進(jìn)行作用機(jī)制研究，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.SPF級(jí)昆明種小鼠60只，體重18～22g，隨機(jī)分為六組，分別為:正常對(duì)照組(生理鹽水灌胃0.2mL/1Og，連

2、續(xù)7天)；環(huán)磷酰胺模型組(生理鹽水灌胃0.2mL/1Og，連續(xù)7天，同時(shí)連續(xù)3天腹腔注射環(huán)磷酰胺5Omg/kg)；陽(yáng)性對(duì)照組(連續(xù)3天腹腔注射環(huán)磷酰胺5Omg/kg造模后，每天灌胃玉屏風(fēng)顆粒混懸液2.25g/kg，連續(xù)7天)；感毒清顆粒高、中、低劑量組(連續(xù)3天腹腔注射環(huán)磷酰胺5Omg/kg造模后，每天分別灌胃感毒清顆粒8.1g/kg，4.05g/kg，2.025g/kg，連續(xù)7天)，建立免疫功能低下小鼠模型。末次給藥后小鼠禁食12h，

3、摘除眼球采血，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血液中NKT細(xì)胞百分比含量。
　　2.造模及給藥方法同1，眼球采血后，處死小鼠，分別取胸腺、脾臟稱重，計(jì)算胸腺、脾臟指數(shù)。將胸腺制成組織勻漿，離心，取上清，進(jìn)行IFN-γ、IL-2、IL-4檢測(cè)。
　　3.造模及給藥方法同1,小鼠處死后，取脾，立即置液氮中，隨后轉(zhuǎn)移置-80℃低溫冰箱保存，采用免疫組織化染色法檢測(cè)脾臟T-Bet、GATA-3蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.與正常對(duì)照

4、組相比，環(huán)磷酰胺模型組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著降低(P<0.05)，給藥后，感毒清顆粒各劑量組、玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組、模型組之間比較，無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　2.與正常對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺模型組NKT數(shù)量明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高劑量組外周血NKT細(xì)胞數(shù)量明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。感毒清顆粒中劑量組、玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組外周血NKT細(xì)胞數(shù)量亦有所提高

5、，但與環(huán)磷酰胺模型組比較，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　3.與正常對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺模型組IFN-γ、IL-2數(shù)量明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中、低劑量組胸腺組織勻漿液IFN-γ表達(dá)明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05）；玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組胸腺組織勻漿液IFN-γ表達(dá)與環(huán)磷酰胺模型組比較，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　給藥后，感毒清顆粒高劑量組胸腺組織

6、勻漿液IL-2表達(dá)明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。感毒清顆粒中、低劑量組、玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組胸腺組織勻漿液IL-2表達(dá)與環(huán)磷酰胺模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　與正常對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺模型組IL-4表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中劑量組、玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組胸腺組織勻漿液IL-4表達(dá)明顯低于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05）；感毒

7、清顆粒高、中劑量組胸腺組織勻漿液IL-4表達(dá)與玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4.與正常對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺模型組脾臟 T-bet表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中劑量組、玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組脾臟T-bet表達(dá)明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05），說(shuō)明感毒清顆粒、玉屏風(fēng)顆?？梢蕴岣呙庖咭种菩∈笃⑴K組織T-bet的表達(dá)。感毒清顆粒高劑量組脾臟組

8、織T-bet表達(dá)與玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明感毒清顆粒提高免疫抑制小鼠脾臟組織T-bet表達(dá)的作用與玉屏風(fēng)顆粒相當(dāng)。
　　與正常對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺模型組脾臟GATA-3表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中、低劑量組、玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組脾臟GATA-3表達(dá)明顯低于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05），說(shuō)明感毒清顆粒、玉屏風(fēng)顆?？梢越档兔庖咭种菩∈?/p>

9、脾臟組織GATA-3的表達(dá)。感毒清顆粒高劑量組脾臟組織GATA-3表達(dá)與玉屏風(fēng)陽(yáng)性對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明感毒清顆粒降低免疫抑制小鼠脾臟組織GATA-3表達(dá)的作用與玉屏風(fēng)顆粒相當(dāng)。
　　5.感毒清顆粒的上述作用皆呈現(xiàn)一定的量效依賴關(guān)系，高、中劑量組作用優(yōu)于低劑量組。
　　結(jié)論:
　　1.采用免疫抑制劑環(huán)磷酰胺制造免疫抑制小鼠模型，造模后小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)下降，說(shuō)明使用環(huán)磷酰胺造模成功。

10、r>　　2.感毒清顆?？梢蕴岣呙庖咭种菩∈笸庵苎狽KT細(xì)胞數(shù)量，通過(guò)影響外周血NKT細(xì)胞數(shù)量，使機(jī)體的固有免疫向正常方向恢復(fù)。
　　3.感毒清顆?？梢蕴岣呙庖咭种菩∈笮叵俳M織IFN-γ、IL-2含量，降低IL-4含量，平衡TH1/TH2亞群細(xì)胞因子的比例，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞含量，其效果與玉屏風(fēng)顆粒相當(dāng)。
　　4.感毒清顆粒調(diào)節(jié)TH1/TH2亞群細(xì)胞因子比例的作用，可能部分源于對(duì)TH1/TH2亞群主要轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3

11、表達(dá)的影響，其效果與玉屏風(fēng)顆粒相當(dāng)。
　　第二部分、感毒清顆粒治療急性上呼吸道感染(氣虛邪犯證)的臨床觀察及對(duì)患者免疫功能影響的臨床研究
　　目的:通過(guò)臨床觀察，分析感毒清顆粒治療急性上呼吸道感染(氣虛邪犯證)的臨床療效及其對(duì)患者外周血T細(xì)胞亞群、B細(xì)胞、NK細(xì)胞含量的影響。論證感毒清顆粒治療急性上呼吸道感染氣虛邪犯證的可行性和有效性，為臨床用藥提供依據(jù)，為開發(fā)新型治療急性上呼吸道感染制劑奠定基礎(chǔ)。
　　方法:將201

12、2年12月至2013年3月期間，就診于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、成都市西安路羊西線社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站的急性上呼吸道感染患者39例納入研究范圍，隨機(jī)分為治療組26例，對(duì)照組13例。治療組給予感毒清顆粒，對(duì)照組給予抗病毒顆粒，進(jìn)行療程為3天的臨床觀察。從治療組隨機(jī)選取11例，對(duì)照組隨機(jī)選取11例，采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)兩組患者治療前后全血中T細(xì)胞亞群、B細(xì)胞、NK細(xì)胞百分比含量，并進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:
　　1、治療組和對(duì)照組療效比較

13、，愈顯率比較有顯著性差異(P<0.05)。感毒清治療組愈顯率為87.5％，總有效率為100%；抗病毒對(duì)照組愈顯率為27.3%,總有效率為100%；治療組愈顯率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2、兩組治療后主癥發(fā)熱、咽痛、倦怠乏力、氣短懶言均有明顯緩解。感毒清組各主癥治療前后比較均有顯著性差異(P<0.05)；抗病毒組發(fā)熱、咽痛治療前后比較有顯著性差異(P<0.05)，倦怠乏力、氣短懶言治療前后比較無(wú)顯著性差

14、異(P>0.05)。感毒清顆粒緩解主癥發(fā)熱、咽痛、倦怠乏力、氣短懶言的療效優(yōu)于抗病毒顆粒。
　　3、兩組治療后次要癥狀惡風(fēng)寒、汗出不暢、頭痛、鼻塞、流涕、咳嗽治療3天后也有緩解。感毒清組治療前后各次要癥狀比較有顯著性差異（P<0.05）；抗病毒組汗出不暢、頭痛、鼻塞、咳嗽治療前后比較有顯著性差異(P<0.05)，惡風(fēng)寒、流涕治療前后比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。感毒清顆粒緩解次要癥狀惡風(fēng)寒、汗出不暢、頭痛、鼻塞、流涕、咳嗽的療

15、效優(yōu)于抗病毒顆粒。
　　4、治療后，感毒清組全血中T細(xì)胞亞群、B細(xì)胞、NK細(xì)胞百分比含量較治療前均有明顯的上升趨勢(shì)，其中CD4/CD8的比值治療前后比較有顯著性差異(P<0.05)；抗病毒組全血中T細(xì)胞亞群治療前后未有明顯的變化，B細(xì)胞、NK細(xì)胞百分比有上升的趨勢(shì)，但與治療前比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。兩組組間全血中 T細(xì)胞亞群、B細(xì)胞、NK細(xì)胞百分比含量水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：感毒清