感毒清顆粒對免疫功能影響的實驗和臨床研究.pdf

1、第一部分、感毒清顆粒對環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能影響的實驗研究
　　目的:為了探討感毒清顆粒對免疫抑制小鼠的免疫調節(jié)作用，本研究通過建立免疫抑制小鼠模型，觀察感毒清顆粒對免疫抑制小鼠免疫器官臟器指數(shù)和免疫細胞、免疫分子含量等方面的影響，并進行作用機制研究，為其臨床應用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.SPF級昆明種小鼠60只，體重18～22g，隨機分為六組，分別為:正常對照組(生理鹽水灌胃0.2mL/1Og，連

2、續(xù)7天)；環(huán)磷酰胺模型組(生理鹽水灌胃0.2mL/1Og，連續(xù)7天，同時連續(xù)3天腹腔注射環(huán)磷酰胺5Omg/kg)；陽性對照組(連續(xù)3天腹腔注射環(huán)磷酰胺5Omg/kg造模后，每天灌胃玉屏風顆?；鞈乙?.25g/kg，連續(xù)7天)；感毒清顆粒高、中、低劑量組(連續(xù)3天腹腔注射環(huán)磷酰胺5Omg/kg造模后，每天分別灌胃感毒清顆粒8.1g/kg，4.05g/kg，2.025g/kg，連續(xù)7天)，建立免疫功能低下小鼠模型。末次給藥后小鼠禁食12h，

3、摘除眼球采血，采用流式細胞術檢測血液中NKT細胞百分比含量。
　　2.造模及給藥方法同1，眼球采血后，處死小鼠，分別取胸腺、脾臟稱重，計算胸腺、脾臟指數(shù)。將胸腺制成組織勻漿，離心，取上清，進行IFN-γ、IL-2、IL-4檢測。
　　3.造模及給藥方法同1,小鼠處死后，取脾，立即置液氮中，隨后轉移置-80℃低溫冰箱保存，采用免疫組織化染色法檢測脾臟T-Bet、GATA-3蛋白表達。
　　結果:
　　1.與正常對照

4、組相比，環(huán)磷酰胺模型組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著降低(P<0.05)，給藥后，感毒清顆粒各劑量組、玉屏風陽性對照組、模型組之間比較，無顯著性差異(P>0.05)。
　　2.與正常對照組相比，環(huán)磷酰胺模型組NKT數(shù)量明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高劑量組外周血NKT細胞數(shù)量明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。感毒清顆粒中劑量組、玉屏風陽性對照組外周血NKT細胞數(shù)量亦有所提高

5、，但與環(huán)磷酰胺模型組比較，無顯著性差異（P>0.05）。
　　3.與正常對照組相比，環(huán)磷酰胺模型組IFN-γ、IL-2數(shù)量明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中、低劑量組胸腺組織勻漿液IFN-γ表達明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05）；玉屏風陽性對照組胸腺組織勻漿液IFN-γ表達與環(huán)磷酰胺模型組比較，無顯著性差異（P>0.05）。
　　給藥后，感毒清顆粒高劑量組胸腺組織

6、勻漿液IL-2表達明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。感毒清顆粒中、低劑量組、玉屏風陽性對照組胸腺組織勻漿液IL-2表達與環(huán)磷酰胺模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　與正常對照組相比，環(huán)磷酰胺模型組IL-4表達明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中劑量組、玉屏風陽性對照組胸腺組織勻漿液IL-4表達明顯低于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05）；感毒

7、清顆粒高、中劑量組胸腺組織勻漿液IL-4表達與玉屏風陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　4.與正常對照組相比，環(huán)磷酰胺模型組脾臟 T-bet表達明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中劑量組、玉屏風陽性對照組脾臟T-bet表達明顯高于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05），說明感毒清顆粒、玉屏風顆?？梢蕴岣呙庖咭种菩∈笃⑴K組織T-bet的表達。感毒清顆粒高劑量組脾臟組

8、織T-bet表達與玉屏風陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明感毒清顆粒提高免疫抑制小鼠脾臟組織T-bet表達的作用與玉屏風顆粒相當。
　　與正常對照組相比，環(huán)磷酰胺模型組脾臟GATA-3表達明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；給藥后，感毒清顆粒高、中、低劑量組、玉屏風陽性對照組脾臟GATA-3表達明顯低于環(huán)磷酰胺模型組，有顯著性差異（P<0.05），說明感毒清顆粒、玉屏風顆?？梢越档兔庖咭种菩∈?/p>

9、脾臟組織GATA-3的表達。感毒清顆粒高劑量組脾臟組織GATA-3表達與玉屏風陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明感毒清顆粒降低免疫抑制小鼠脾臟組織GATA-3表達的作用與玉屏風顆粒相當。
　　5.感毒清顆粒的上述作用皆呈現(xiàn)一定的量效依賴關系，高、中劑量組作用優(yōu)于低劑量組。
　　結論:
　　1.采用免疫抑制劑環(huán)磷酰胺制造免疫抑制小鼠模型，造模后小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)下降，說明使用環(huán)磷酰胺造模成功。

10、r>　　2.感毒清顆粒可以提高免疫抑制小鼠外周血NKT細胞數(shù)量，通過影響外周血NKT細胞數(shù)量，使機體的固有免疫向正常方向恢復。
　　3.感毒清顆粒可以提高免疫抑制小鼠胸腺組織IFN-γ、IL-2含量，降低IL-4含量，平衡TH1/TH2亞群細胞因子的比例，調節(jié)免疫細胞含量，其效果與玉屏風顆粒相當。
　　4.感毒清顆粒調節(jié)TH1/TH2亞群細胞因子比例的作用，可能部分源于對TH1/TH2亞群主要轉錄因子T-bet和GATA-3

11、表達的影響，其效果與玉屏風顆粒相當。
　　第二部分、感毒清顆粒治療急性上呼吸道感染(氣虛邪犯證)的臨床觀察及對患者免疫功能影響的臨床研究
　　目的:通過臨床觀察，分析感毒清顆粒治療急性上呼吸道感染(氣虛邪犯證)的臨床療效及其對患者外周血T細胞亞群、B細胞、NK細胞含量的影響。論證感毒清顆粒治療急性上呼吸道感染氣虛邪犯證的可行性和有效性，為臨床用藥提供依據(jù)，為開發(fā)新型治療急性上呼吸道感染制劑奠定基礎。
　　方法:將201

12、2年12月至2013年3月期間，就診于成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院、成都市西安路羊西線社區(qū)衛(wèi)生服務站的急性上呼吸道感染患者39例納入研究范圍，隨機分為治療組26例，對照組13例。治療組給予感毒清顆粒，對照組給予抗病毒顆粒，進行療程為3天的臨床觀察。從治療組隨機選取11例，對照組隨機選取11例，采用流式細胞術分別檢測兩組患者治療前后全血中T細胞亞群、B細胞、NK細胞百分比含量，并進行比較。
　　結果:
　　1、治療組和對照組療效比較

13、，愈顯率比較有顯著性差異(P<0.05)。感毒清治療組愈顯率為87.5％，總有效率為100%；抗病毒對照組愈顯率為27.3%,總有效率為100%；治療組愈顯率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2、兩組治療后主癥發(fā)熱、咽痛、倦怠乏力、氣短懶言均有明顯緩解。感毒清組各主癥治療前后比較均有顯著性差異(P<0.05)；抗病毒組發(fā)熱、咽痛治療前后比較有顯著性差異(P<0.05)，倦怠乏力、氣短懶言治療前后比較無顯著性差

14、異(P>0.05)。感毒清顆粒緩解主癥發(fā)熱、咽痛、倦怠乏力、氣短懶言的療效優(yōu)于抗病毒顆粒。
　　3、兩組治療后次要癥狀惡風寒、汗出不暢、頭痛、鼻塞、流涕、咳嗽治療3天后也有緩解。感毒清組治療前后各次要癥狀比較有顯著性差異（P<0.05）；抗病毒組汗出不暢、頭痛、鼻塞、咳嗽治療前后比較有顯著性差異(P<0.05)，惡風寒、流涕治療前后比較無顯著性差異(P>0.05)。感毒清顆粒緩解次要癥狀惡風寒、汗出不暢、頭痛、鼻塞、流涕、咳嗽的療

15、效優(yōu)于抗病毒顆粒。
　　4、治療后，感毒清組全血中T細胞亞群、B細胞、NK細胞百分比含量較治療前均有明顯的上升趨勢，其中CD4/CD8的比值治療前后比較有顯著性差異(P<0.05)；抗病毒組全血中T細胞亞群治療前后未有明顯的變化，B細胞、NK細胞百分比有上升的趨勢，但與治療前比較均無顯著性差異(P>0.05)。兩組組間全血中 T細胞亞群、B細胞、NK細胞百分比含量水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：感毒清