蝎毒多肽對(duì)放化療致骨髓抑制小鼠造血和免疫功能的影響.pdf

1、背景和目的：臨床上治療惡性腫瘤的三大常規(guī)手段依然是：手術(shù)、放療及化療，而放、化療往往導(dǎo)致患者外周血白細(xì)胞及其他血細(xì)胞總數(shù)降低，造血功能及免疫功能受損，導(dǎo)致放化療的實(shí)施受到限制。而對(duì)于血液系統(tǒng)惡性腫瘤的病人，在進(jìn)行骨髓移植后患者免疫機(jī)能長(zhǎng)期缺損，免疫重建大大遲于造血重建，甚至移植后兩年免疫功能仍有缺陷。這些情況均使患者發(fā)生感染和腫瘤復(fù)發(fā)的可能性增大。目前入住層流病房、大量輸注抗生素等支持療法和對(duì)癥措施的應(yīng)用，使治療費(fèi)用更加昂貴，毒副作用明

2、顯。因此，腫瘤放化療后及骨髓移植后的免疫功能低下是臨床急待解決的問(wèn)題。全蝎為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥，其有效成分蝎毒含有多種具有重要生理功能的活性物質(zhì)。蝎毒多肽是從東亞鉗蝎蝎毒中通過(guò)凝膠過(guò)濾、離子交換、高效液相色譜等方法分離純化得到的多肽。前期實(shí)驗(yàn)觀察到：蝎毒多肽能殺傷體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞株，能使荷瘤小鼠的瘤塊體積縮小，同時(shí)能夠減輕荷瘤小鼠放化療所致的造血和免疫功能損傷。本研究利用放、化療致正常小鼠骨髓抑制模型，全面系統(tǒng)的觀察應(yīng)用蝎毒多肽后骨髓

3、抑制小鼠造血和免疫功能恢復(fù)的情況，并探討蝎毒多肽促進(jìn)造血恢復(fù)過(guò)程的可能機(jī)制。 材料和方法：雄性昆明小鼠被分為六組：正常對(duì)照組、生理鹽水對(duì)照組、低劑量蝎毒多肽組(0.025mg/kg)和高劑量蝎毒多肽組(0.05mg/kg)(Ⅳ、Ⅴ兩種蝎毒多肽組分，分別是半數(shù)致死量的1/20和1/10)，除正常對(duì)照組以外，其余各-3-組連續(xù)10天腹腔注射生理鹽水或蝎毒多肽，并于開始注射后的第4天給予6.0GyX射線一次性全身照射，于照射后不同天數(shù)

4、采集標(biāo)本，計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞數(shù)、骨髓有核細(xì)胞數(shù)、CFU-GM和骨髓基質(zhì)細(xì)胞集落數(shù)、脾結(jié)節(jié)數(shù)，計(jì)算胸腺和脾重指數(shù)，采用組織芯片、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè)胸骨骨髓組織，骨髓沖洗液上清以及血清中不同細(xì)胞因子的含量，并將骨髓細(xì)胞用碘化丙碇(PI)單染后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓細(xì)胞的細(xì)胞周期及其增殖情況。雄性BALB/c小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺(120mg/kg)一次致骨髓抑制，注射環(huán)磷酰胺前3天開始，連續(xù)腹腔注射蝎毒多肽，每天一次，共10天，應(yīng)用造血祖

5、細(xì)胞培養(yǎng)、流式細(xì)胞術(shù)等方法，觀察蝎毒多肽對(duì)環(huán)磷酰胺(CTX)化療后第14天小鼠骨髓粒單系集落形成單位(CFU-GM)以及CD34、CD117(c-kit)、CD3、CD19等抗原陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量的影響，并進(jìn)行骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和觀察小鼠的生存狀況。 結(jié)果：與生理鹽水對(duì)照組相比，照射前后注射蝎毒多肽，骨髓有核細(xì)胞數(shù)、骨髓粒單系祖細(xì)胞集落形成單位(CFU-GM)數(shù)量、骨髓基質(zhì)細(xì)胞集落數(shù)、脾結(jié)節(jié)數(shù)等均有升高。碘化丙碇(PI)單染后流式細(xì)胞儀

6、檢測(cè)骨髓細(xì)胞周期顯示蝎毒多肽組小鼠骨髓細(xì)胞的增殖指數(shù)在照射后第21天比對(duì)照組有顯著提高。但在照射后觀察的一個(gè)月時(shí)間內(nèi)，蝎毒多肽組的外周血白細(xì)胞數(shù)以及胸腺和脾重指數(shù)與生理鹽水對(duì)照組(放療模型組)相比未見明顯區(qū)別。蝎毒多肽組小鼠在照射后，胸骨骨髓組織的SCF和IL-1α含量、以及骨髓細(xì)胞沖洗液上清和血清中IL-6和GM-CSF的含量與生理鹽水對(duì)照組相比有所升高。與化療模型組相比，蝎毒多肽組小鼠的骨髓有核細(xì)胞數(shù)、骨髓CFU-GM集落數(shù)以及骨髓