冬病夏治方的制劑開(kāi)發(fā)及作用機(jī)理研究.pdf

1、第一部分、冬病夏治方凝膠劑的開(kāi)發(fā)研究。 目的： 1．采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)選冬病夏治方凝膠劑的最佳提取工藝。 2．采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)選冬病夏治方凝膠劑基質(zhì)的最佳成型工藝。以最佳成型工藝制備基質(zhì)，進(jìn)一步優(yōu)選凝膠劑的最佳加藥方式。 3．建立冬病夏治方凝膠劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 方法： 1．冬病夏治方凝膠劑提取工藝研究： 采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以得膏率和鹽酸麻黃堿含量為考察指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法，考

2、察乙醇濃度，乙醇用量，提取時(shí)間三個(gè)因素對(duì)得膏率及提取有效成分的影響，優(yōu)選最佳提取工藝。同時(shí)以鹽酸麻黃堿的含量為指標(biāo)，比較蒸餾法、萃取法和洗脫法，優(yōu)選最佳含量測(cè)定樣品處理方式。 2．冬病夏治方凝膠劑成型工藝研究： 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和相關(guān)文獻(xiàn)資料，確定以卡波姆（Carpobol 981NF）、聚丙烯酸鈉（PAAS）、明膠、聚乙烯醇（PVA）與聚乙烯基吡咯烷酮（PVPK-30）的含量為因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。以可涂膜性、黏著力、賦形性

3、為主要指標(biāo)，采用滾球試驗(yàn)和賦形性試驗(yàn)對(duì)冬病夏治方凝膠劑質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，采用綜合評(píng)分法考察不同基質(zhì)比例對(duì)成型工藝的影響，確定凝膠劑最佳配比。最終確定最佳成型工藝。 以藥物與基質(zhì)的相容性（藥料與基質(zhì)混勻的難易程度），色澤均勻性，載藥量三個(gè)因素為指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法，考察不同加藥方式對(duì)成品質(zhì)量的影響。 3．采用TLC法鑒別方中芥子、延胡索、細(xì)辛。采用HPLC法測(cè)定方中鹽酸麻黃堿的含量，并進(jìn)行方法學(xué)考察。 結(jié)果：

4、1．優(yōu)選得到的最佳提取工藝條件為：以8倍量70%的乙醇，回流提取2次，每次1小時(shí)。驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)表明浸膏得率為12．41%，鹽酸麻黃堿提取率為12．0mg/g。以洗脫法制備含量測(cè)定樣品為最佳。 2．優(yōu)選得到的最佳成型工藝條件為：卡波姆-聚丙烯酸鈉-明膠-PVA-PVPK30的比例為0．5：1．0：2．0：0．2：0．2?；|(zhì)的制備方法為：取聚丙烯酸鈉、PVA、PVPK30于H20中，加熱攪拌至完全溶解后加入明膠，再加熱攪拌至完全溶解

5、備用（A相）。取卡波姆均勻撒于水面，潤(rùn)脹24h后，加熱使溶解。緩慢加入三乙醇胺，邊加邊攪至pH約為8，靜置熟化12h，再加三乙醇胺調(diào)pH約為8．0，靜置12h（B相）。將A相加入到B相中，攪勻，加入檸檬酸與結(jié)晶氯化鋁的水溶液，快速攪拌均勻后，再均勻涂布于無(wú)紡布基材上，即得。優(yōu)選得到的最佳加藥方式為：甘遂、細(xì)辛、延胡索、黃芩以70%乙醇提取得到浸膏，芥子超微粉加入甘油混勻后加入以上浸膏中，混勻，再加入基質(zhì)中制成。 3．定性鑒別中檢

6、出芥子、延胡索、細(xì)辛，且分離度好、專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。HPLC測(cè)定鹽酸麻黃堿在0．032-0．096 μg的范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系．（R2=0．9998），平均回收率為：98．43%，RSD為0．78%，凝膠物中鹽酸麻黃堿含量為4．36mg/g。 結(jié)論： 1．正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選所得工藝穩(wěn)定、合理可行，提取率高，可為工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2．正交實(shí)驗(yàn)所得成型工藝處方合理，工藝可行。制備的成品延展性好、黏性適中、

7、賦形性好。采用先將藥物混勻再加入基質(zhì)的方式，藥物與基質(zhì)的相容性良好、成品色澤均勻，載藥量大。 3．所建立的質(zhì)量控制方法準(zhǔn)確、可靠、專屬性強(qiáng)，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。 第二部分、基于代謝組學(xué)的冬病夏治方穴位貼敷治療哮喘的作用機(jī)理研究。 目的： 代謝組學(xué)主要研究生物體對(duì)病理生理刺激或基因修飾所產(chǎn)生代謝物的質(zhì)和量的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，這種基于整體觀念的研究模式可全面了解代謝物質(zhì)在疾病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的變化規(guī)律，對(duì)發(fā)

8、病機(jī)制研究以及疾病的診斷、治療、療效評(píng)估及新藥開(kāi)發(fā)具有重要意義。本課題基于現(xiàn)代生物質(zhì)譜技術(shù)，采用代謝組學(xué)方法，對(duì)冬病夏治方治療哮喘的機(jī)理進(jìn)行研究。 方法： 建立超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC/MS）為基礎(chǔ)的代謝組學(xué)技術(shù)平臺(tái)，對(duì)各組動(dòng)物的血樣及尿樣進(jìn)行代謝譜檢測(cè)。原始數(shù)據(jù)采用Micromass Markerlynx用歸一化的方法進(jìn)行處理。輸出后利用SIMCA軟件進(jìn)行多維統(tǒng)計(jì)分析，通過(guò)偏最小二乘法一判別分析（PLS-DA

9、）進(jìn)行模式識(shí)別。 結(jié)果： 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于血樣代謝物譜，各組動(dòng)物均呈現(xiàn)聚類型分布，兩組之間未見(jiàn)任何交叉與重疊，得到了明顯區(qū)分。對(duì)于尿樣代謝物譜，哮喘模型組和空白組、穴位給藥組與哮喘模型組、非穴位給藥組與哮喘模型組，呈現(xiàn)聚類型分布，兩組之間未見(jiàn)任何交叉與重疊，得到了明顯區(qū)分。但穴位給藥組與非穴位給藥組、陽(yáng)性對(duì)照藥與穴位給藥組沒(méi)有得到明顯區(qū)分。初步確認(rèn)氮4-乙?；眨∟4-acetylcytidine，ac4c）、6-甲基腺