基于葛根芩連湯主要難溶性有效成分的新型自微乳給藥系統(tǒng)吸收機理研究.pdf

1、目的：本文是在已有研究基礎(chǔ)上的繼續(xù)與深入，已有研究采用天然乳化劑（natural emulsifier，NE）取代50％合成非離子型表面活性劑（nonionic surfactants，NS），成功構(gòu)建了同時含有葛根芩連湯中三種主要難溶性成分葛根素（Pueratin，PUE）、黃芩苷（Baicalin，BA）、鹽酸小檗堿（Berberine Hydrochloride，BH）的新型自微乳化給藥系統(tǒng)（NE self-miroemulsif

2、ying drug delivery system，NE- SMEDDS）與NS-SMEDDS。本文從細胞（in vitro）、腸灌流（in situ）及動物（in vivo）多個水平研究PUE、BH、BA吸收機制及他們對吸收的相互影響；NE-SMEDDS與NS-SMEDDS對PUE、BH、BA吸收的促進作用及NE-SMEDDS是否降低NS-SMEDDS的毒性；磷脂復合物（phospholipid complex，PC）及PC-SMED

3、DS對BA吸收的促進作用。
　　方法：（1）構(gòu)建Caco-2細胞模型，從細胞水平研究PUE、BH、BA及其SMEDDS的細胞吸收轉(zhuǎn)運特性。通過比較表觀通透系數(shù)(Papp)、累積轉(zhuǎn)運量(ΔQ)、轉(zhuǎn)運速率（v）和藥物外排率（efflux rate，ER）等參數(shù)，①考察濃度、時間、P-gp抑制劑（維拉帕米）對PUE、BH、BA及他們的SMEDDS（NE-SMEDDS及NS-SMEDDS）轉(zhuǎn)運機制的影響；②考察PUE+BH+BA及他們的S

4、MEDDS體系中各成分的相互影響；③將BA制成BA-PC，研究不同藥脂比（1:2.5、1:3.0、1:4）對BA吸收機制的影響，以及將BA-PC進一步制成SMEDDS對BA吸收的影響。
　　（2）構(gòu)建大鼠在體腸灌流模型，從在體器官水平研究 PUE、BH、BA及其 SMEDDS的腸道吸收。①考察PUE、BH、BA單種成分、三種成分及單種成分與三種成分的SMEDDS不同腸段、濃度的小腸吸收，通過吸收速率常數(shù)（Ka）、表觀滲透系數(shù)(Pe

5、ff)等參數(shù)，比較PUE、BH、BA在腸道的主要吸收部位及吸收特性；②研究藥脂比為1:2.5和1:4.0的BA-PC及BA-PC- SMEDDS對BA腸道吸收的影響。
　　（3）構(gòu)建大鼠腸系膜淋巴模型，從動物水平研究PUE+BH+BA及他們的SMEDDS通過淋巴循環(huán)和血液循環(huán)的吸收相關(guān)性。采用SD大鼠口服給藥，①收集不同時間段的淋巴液，以1h為一個時間段，共收集12h；②通過眼眶取血，收集不同時間點（0、0.17、0.25、0.5

6、、0.75、1、2、4、6、8、10、12h）的血液；○3樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白后流動相復溶，HPLC檢測淋巴液和血液中各成分濃度，將淋巴轉(zhuǎn)運結(jié)果與藥動學數(shù)據(jù)進行比較，考察兩種SMEDDS中三種成分通過淋巴與血液吸收的差異性及相關(guān)性。
　　（4）采用MTT法考察兩種SMEDDS的細胞毒性，通過免疫熒光法和測定細胞跨膜電阻值（Trans epithelial electric resistance，TEER）研究兩種SMEDDS對細胞完

7、整性的影響。
　　結(jié)果：（1）Caco-2細胞模型研究。PUE、BH及 BA均屬于小腸難吸收成分，而且主要為被動吸收機制。PUE、BH與BA均為P-gp底物，但外排轉(zhuǎn)運以BH最強，BH的外排率分別是PUE、BA的4.85倍和8.78倍。成分之間存在吸收的相互影響：PUE對BH、BA均有顯著的促吸收作用；BH與BA之間相互抑制，以BA的抑制作用更強；BH抑制PUE細胞轉(zhuǎn)運的作用明顯大于BA。PUE與BH單一成分的SMEDDS能促進P

8、UE及BH的吸收，而且NS-SMEDDS轉(zhuǎn)運速率高于NE-SMEDDS，同時不改變PUE與BH的吸收機制。PC可以增加BA脂溶性，提高BA生物膜轉(zhuǎn)運量，然而隨著藥脂比增加，BA-PC的吸收呈下降趨勢。但BA-PC制備成SMEDDS后有利于PC分散，對提高BA的生物膜轉(zhuǎn)運產(chǎn)生協(xié)同作用，而且藥脂比越高的SMEDDS越有利于促進BA的吸收，BA-PC-NS-SMEDDS中BA的吸收整體高于BA-PC-NE-SMEDDS。研究結(jié)果表明SMEDD

9、S可以同步促進三種成分配伍后的吸收。
　?。?）大鼠在體腸灌流模型研究。在Caco-2細胞模型研究基礎(chǔ)上，進一步說明PUE、BA的腸道吸收屬于一級動力學過程，三者在腸道內(nèi)的吸收均主要為被動擴散機制。PUE與BA單一成分的吸收部位主要在結(jié)腸，BH在小腸上段。將PUE、BH、BA單一成分分別制備成SMEDDS，在促進藥物各個腸段吸收的同時不改變藥物的主要吸收部位。隨著藥脂比增加，BA-PC的吸收同樣呈下降趨勢，然而藥脂比越高的SMED

10、DS越有利于促進BA的吸收。三種成分配伍時，各成分吸收均有所降低，成分之間存在相互作用，結(jié)果類似于Caco-2細胞模型，而且PUE、BH、BA的主要吸收部位均在結(jié)腸。將三種成分制成兩種不同的SMEDDS，可以同步促進PUE、BH、BA的腸道吸收，而且SMEDDS中PUE、BH、BA的主要吸收部位仍在結(jié)腸。
　?。?）大鼠腸系膜淋巴模型研究。不同給藥組中，PUE、BH、BA在血液循環(huán)和淋巴循環(huán)中均有吸收，但血液吸收量多于淋巴。各成分

11、吸收總量的大小依次為 PUE＞BA＞BH（P＜0.05），BH通過血液循環(huán)和淋巴循環(huán)吸收均很少，明顯低于PUE與BA（P＜0.05）；淋巴轉(zhuǎn)運比例大小依次為PUE＞BH＞BA，BA各給藥組均從血液循環(huán)吸收為主。SMEDDS對 PUE、BH、BA淋巴轉(zhuǎn)運具有顯著性促進。SMEDDS促進 PUE吸收作用尤為突出，NS-SMEDDS與NE-SMEDDS對PUE的淋巴轉(zhuǎn)運量具有顯著性差異；藥脂比為1:4.0的PC與SMEDDS聯(lián)合促進了BA的淋

12、巴吸收量，并且PC-NS-SMEDDS中BA淋巴轉(zhuǎn)運相對較高。
　?。?）Caco-2細胞毒性與完整性研究。MTT實驗、測定TEER值以及免疫熒光實驗結(jié)果表明兩種 SMEDDS都能通過破壞細胞膜的骨架和緊密結(jié)構(gòu)蛋白來改變細胞膜的完整性與流動性，增加細胞膜的通透性，從而促進藥物跨膜轉(zhuǎn)運，且含有吐溫-80越多的NS-SMEDDS對細胞膜的通透作用更大。
　　結(jié)論：研究結(jié)果表明，PUE、BH及BA均以被動吸收為主，同是P-糖蛋白的