用人骨髓間充質(zhì)干細胞篩選人類抗砷相關(guān)基因.pdf

1、目的：長期低劑量亞砷酸鈉誘導人骨髓間充質(zhì)干細胞，從而建立抗砷細胞模型，篩選人類抗砷相關(guān)基因。 方法：常規(guī)條件下分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞，檢測部分生物學特性；實驗組用1 μmol/L的亞砷酸鈉誘導)14周，對照組不加砷劑平行培養(yǎng)；48小時急性砷毒性試驗檢測細胞生存率；免疫熒光染色及熒光激活細胞分選術(shù)鑒定誘導前后細胞表面分子；流式細胞術(shù)進行細胞周期及凋亡檢測；實時定量PCR檢測不同誘導時間金屬硫蛋白MT1E、多藥耐藥蛋白基因MRP

2、1、人類抗砷相關(guān)基因HARRG的表達豐度；軟瓊脂試驗檢測細胞是否發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化；實驗組細胞獲得抗砷性之后，抽提并純化實驗組和對照組細胞總RNA，分別與Affymetrix UC133 plus 2.0 cDNA表達譜芯片雜交，生物信息學分析差異表達基因并初步進行功能分類。 結(jié)果：低劑量亞砷酸鈉急性刺激能夠促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖，長期誘導則表現(xiàn)為抑制細胞生長：1 μmol/L，的亞砷酸鈉誘導骨髓間充質(zhì)干細胞10周后細胞初步表現(xiàn)出

3、了抗砷性，14周后抗性較明顯。人骨髓間充質(zhì)干細胞砷誘導后表型無明顯變化，而細胞周期的變化較大，急性刺激期G2/M期和S期細胞增加，G0/G1期細胞減少，適應(yīng)后細胞周期恢復至誘導前水平：長期1 μmol/L亞砷酸鈉誘導不引起人骨髓間充質(zhì)干細胞發(fā)生凋亡，超過5 μmol/L急性刺激則能夠誘導其凋亡；人骨髓間充質(zhì)干細胞砷誘導一定時期內(nèi)MTlE、MRP1、HARRG表達增高，并呈動態(tài)變化趨勢；長期砷誘導后人骨髓間充質(zhì)干細胞在雙層軟瓊脂上不能克隆