變形鏈球菌乳酸脫氫酶與霍亂毒素B亞單位嵌合表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化煙草研究.pdf

1、敏誦中閣分類號(hào)：R 7 8學(xué)科代號(hào)：1 0 0 3 0 2Y 9 7 9 8 2 8學(xué)校代碼：1 0 6 6 1研究生學(xué)號(hào)；2 0 0 3 0 9 5薹秀霪警恐碩士研究生畢業(yè)論文變形鏈球菌乳酸脫氫酶與霍亂毒素B 亞單位嵌合表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化煙草研究C o n s t r u c t i o n o f t h eF u s e d V e c t o r o f L a c t a t ed e h y d r o g e n a s

2、 eo f S t r e p t O C O C C U S M u t a n s a n dC h o l e r a’r o x i nB S u b u n i t a n dT o b a c c o T r a n s f o r m a t i o n研 究 生 張燕專 業(yè) 口腔臨床醫(yī)學(xué)( 口腔內(nèi)科學(xué))導(dǎo) 師 劉建國(guó)教授指導(dǎo)小組老師 馬欣榮副研究員楊德琴副教授研究起止日期二O o 五年一月至二o o 五年十二月二0 0

3、六年四月中國(guó)·遵義變形鏈球菌乳酸脫氫酶與霍亂毒素B 亞單位嵌合表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化煙草研究變形鏈球菌乳酸脫氫酶與霍亂毒素B 亞單位嵌合表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化煙草研究摘 要齲病是人類最常見(jiàn)的細(xì)菌感染性疾病之一，嚴(yán)重影響著人類健康。變形鏈球菌( 簡(jiǎn)稱變鏈菌) 是人類齲病的主要致病菌。免疫防齲是控制齲病的有效手段之一。近年來(lái)，利用轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)生產(chǎn)可食疫苗的研究日益發(fā)展。轉(zhuǎn)基因植物疫苗能夠通過(guò)直接口服的給藥方式誘導(dǎo)動(dòng)物和人體的粘膜和系

4、統(tǒng)免疫應(yīng)答，具有安全、有效、廉價(jià)和方便等優(yōu)點(diǎn)，日益顯示出其廣闊的應(yīng)用前景和潛在的經(jīng)濟(jì)效益。目的：構(gòu)建含變鏈菌乳酸脫氫酶編碼基因l d h 和粘膜免疫佐劑霍亂毒素B 亞單位編碼基因c t x B 嵌合基因的原核質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化E ．c o l i B L 2 1 ( D E 3 ) 經(jīng)I P T G 誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白；構(gòu)建該嵌合基因的植物表達(dá)載體并以根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草，獲得轉(zhuǎn)基因煙草，為下一步利用轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)生產(chǎn)可食防齲疫苗的研究打下

5、基礎(chǔ)。方法：本研究共分兩部分：1 ．變鏈菌乳酸脫氫酶和霍亂毒素B 亞單位嵌合基因表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)通過(guò)基因重組技術(shù)構(gòu)建攜帶有變鏈菌乳酸脫氫酶編碼基因l d h 及霍亂毒素B亞單位編碼基因c t x B 的嵌合基因原核表達(dá)質(zhì)粒并經(jīng)I P T G 誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白。此部分包括5 項(xiàng)內(nèi)容：①提取變鏈菌基因組D N A 為模板，設(shè)計(jì)合成引物擴(kuò)增L D H編碼基因l d h ；②目的基因和載體p E T 3 2 a ( + ) 分別以限制性內(nèi)切

6、酶K p nI 和S a c I雙酶切后連接，構(gòu)建質(zhì)粒p E T - l d h ；③以p B S K ．e t x B 為模板，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增目的基因片段c t x B ；④片段c t x B 和質(zhì)粒p E T - l d h 分別以S a cI 和X h o I 雙酶切后連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒p E T - l d h - c t x B ，并經(jīng)酶切、P C R 和插入序列測(cè)序分析鑒定。⑤重組質(zhì)粒p E T - l d h - c t x