變形鏈球菌表面蛋白抗原表位和霍亂毒素B亞單位嵌合表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá).pdf

1、遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文變形鏈球菌表面蛋白抗原表位和霍亂毒素B亞單位嵌合表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)姓名：洪獻(xiàn)忠申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：@指導(dǎo)教師：劉建國張義正20031201墮十畢業(yè)_侖文變形鏈球菌表面蛋白抗原表位和霍亂毒索B亞單位嵌臺質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)接肽為十肽)和pEPCI5(中間連接肽為十五肽)。采用限制性內(nèi)切酶酶切、PCR及重組質(zhì)粒中插入基因的序列測定對四個重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。第二部分變形鏈球菌表面蛋白抗原表位和霍亂毒素B亞單位融合蛋白

2、的表達(dá)將重組質(zhì)粒pEAC5和pEACl0、pEPCI0和pEPCI5轉(zhuǎn)化EcoliB121(DE3)，篩選表達(dá)菌株BLpEAC5和BLpEACl0、BLpEPCI0和BLpEPCI5，將含表達(dá)質(zhì)粒的單克隆菌落在LB培養(yǎng)基(含氨芐青霉素lOOmol／L)中培養(yǎng)(BLpEAC5和BLpEACl0表達(dá)菌株37。C培養(yǎng)、BLpEPCI0和BLpEPCI5表達(dá)菌株26。C培養(yǎng))至A。為0406小時，加入終濃度為lmol／L的ll：rlG，誘導(dǎo)表達(dá)

3、4h后離心收集菌體，進(jìn)行SDS—PAGE分析。結(jié)果：目的基因pacA、pacP、ctxBl和ctxB2定向插入至原核表達(dá)載體pET32a()中，中間連接肽編碼序列與設(shè)計(jì)一致，插入的相位正確，未改變目的基因的閱讀框架。表明四個重組質(zhì)粒pEAC5和pEACl0、pEPCI0和pEPCI5構(gòu)建正確。重組質(zhì)粒pEAC5和pEACIO、pEPCI0和pEPCI5轉(zhuǎn)化EcoliBL一21(DE3)@IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)融合蛋白，分子量與預(yù)期的分子量一