變形鏈球菌表面蛋白抗原Ⅰ-Ⅱ唾液結(jié)合區(qū)段(SBR)基因表達載體的構(gòu)建和表達.pdf_第1頁
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1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文變形鏈球菌表面蛋白抗原ⅠⅡ唾液結(jié)合區(qū)段(SBR)基因表達載體的構(gòu)建和表達姓名:張苗申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):口腔內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師:楊丕山2002.11.10山東大學(xué)碩士學(xué)位論文/方法:、1分別對原核表達質(zhì)粒pSBR—CTA2B、載體質(zhì)粒pcMVT7以限制性內(nèi)切酶NcoI、XhoI雙酶切,回收SBR片段與載體大片段,以定向克隆的方法,構(gòu)建閱讀框架正確的原核表達質(zhì)粒pcMVT7一SBR。2重組質(zhì)粒pcMVT7一SBR轉(zhuǎn)化大腸

2、桿菌JMl09(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測表達產(chǎn)物。3用親和層析的方法純化提純得到羧基端有6個組氨酸的SBR融合蛋白,用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測純化蛋白,用紫外分光光度法測定純化蛋白的濃度。結(jié)果:成功構(gòu)建了閱讀框架正確的原核表達載體pcMVT7一SBR;在大腸桿菌JMl09(DE3)中誘導(dǎo)表達了SBR融合蛋白:通過親和層析的方法純化得到SBR融合蛋白,表達量高達29。73%。結(jié)論:通過限制性內(nèi)切酶酶切初

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