霍亂腸毒素B亞單位在轉(zhuǎn)基因番茄植物中表達(dá)的研究.pdf

1、該論文研究的目的是利用轉(zhuǎn)基因植物的技術(shù),獲得能正確表達(dá)霍亂腸毒素B亞單位(CTB)的番茄,并希望制成在生食后能刺激粘膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)性抗體的疫苗.我們?cè)O(shè)計(jì)將霍亂腸毒素B亞單位(CT-B)基因轉(zhuǎn)入番茄(L.esculentum,金豐一號(hào))中表達(dá),通過(guò)大量預(yù)試驗(yàn)建立了有效的番茄外源基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng),并成功將CT-B基因轉(zhuǎn)入番茄細(xì)胞中,獲得了轉(zhuǎn)基因植株,ELISA檢測(cè)和Western雜交試驗(yàn)的結(jié)果表明CT-B基因在番茄中獲得表達(dá).高效的再生及轉(zhuǎn)

2、化系統(tǒng)是外源目的基因?qū)胫参锏那疤?該研究采用葉盤法,需要考慮外植體的來(lái)源及種類、供體菌株、培養(yǎng)篩選條件等因素.對(duì)13株抗性植株提取基因組DNA,采用PCR和Southern雜交試驗(yàn)的方法,證實(shí)10株顯示CT-B基因整合到番茄基因組DNA中.對(duì)植物表達(dá)抗原基因CT-B的應(yīng)用前景及在植物中表達(dá)所存在的問(wèn)題進(jìn)行了詳細(xì)的討論.在試驗(yàn)過(guò)程中,對(duì)一些分子生物學(xué)試驗(yàn)方法進(jìn)行了改進(jìn),如提高PCR產(chǎn)物亞克隆效率方法,根癌農(nóng)桿菌中重組質(zhì)粒的提取及酶切證實(shí)