大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位單克隆抗體的制備及其B細胞線性表位分析.pdf

1、C l a s s i f i e d I n d e x ：S 8 5 2 ．4C o n f i d e “a l ( y e s ／n o ) ：n oT h e s i sf o r t h eM a s t e r D e g r e eC o d e ：1 0 2 2 4N O ．1 1 0 6 4 4 7P r e p a r a t i o n 0 f M 0 n o C l o n a l A n t i b o d

2、i e sA g a i n s t 互沽c 辦已廊辦砌c D 厲H e a t ．1 a b i l eE n t e r o t o x i n B S u b u n i t a n d I d e n t i f i c a t i o no fL i n e a r B - c e U E p i t o p e sC a n d i d a t e ：L i J i n p i n g ■ VS u p e r v i s

3、o r ：P r o f ．S h i D o n g f ．a n gD e g r e eC a t e g o r y ：M a s t e r o f A g r i c u l t u r eC o l l e g e ：N o r t h e a s t A g r i c u l t u r a lU n i V e r s i t yF i r s t l e V e ld i s c i p l i n e ：V r

4、e t e r i n a r yS c i e n c eS e c o n d l e V e ld i s c i p l i n e ：P r e V e n t i V e 、比t e r i n a 巧M e d i c i n eH a r b i n C h i n aJ u n e 2 0 1 4東北農業(yè)大學農學碩士學位論文3 ．1 ．1 重組質粒p E T - 3 0 a ．L 1 ’B 的鑒定???????????

5、??????????2 43 ．1 ．2 重組蛋白L T B 的誘導表達及純化???????????????????．．2 43 ．1 ．3 重組蛋白L 1 ’B 的鑒定????????????????????????．2 53 ．2 多克隆抗體的制備???????????????????????????2 63 ．3 單克隆抗體的制備???????????????????????????2 63 ．3 ．1 間接E L I S A 方

6、法的建立???????????????????????．2 63 ．3 ．2 雜交瘤細胞的篩選與鑒定??????????????????????．．2 63 ．4 單克隆抗體亞類鑒定和效價檢測?????????????????????．．2 73 ．4 ．1 單克隆抗體亞類鑒定????????????????????????．2 73 ．4 ．2 雜交瘤細胞上清和腹水效價檢測????????????????????2 83 ．5 單克隆

7、抗體的免疫原性鑒定???????????????????????2 83 ．5 ．1 阻斷E L I S A ????????????????????????????2 83 ．5 ．2 W e s t e mb l o t 鑒定??????????????????????????2 83 ．6 單克隆抗體的特異性試驗????????????????????????2 93 ．6 ．1 W e s t e mb l o t 鑒定????

8、??????????????????????2 93 ．6 ．2 阻斷E L I S A ????????????????????????????3 03 ．7 單克隆抗體中和活性試驗????????????????????????3 03 ．7 ．1 L T 對Y 1 細胞的毒性試驗???????????????????????3 03 ．7 ．2 L T 對Y 1 細胞半數(shù)致死量的測定???????????????????．．3 0

9、3 ．7 ．3 單克隆抗體中和滴度的測定??????????????????????3 l3 ．8 L T B 亞單位B 細胞線性抗原表位的分析??????????????????3 23 ．8 ．1 e l t B 基因分段克隆?????????????????????????．．3 23 ．8 ．2 重組質粒的構建與鑒定???????????????????????．．3 23 ．8 ．3 重組短肽的表達??????????????

10、????????????．．3 23 ．8 ．4 重組短肽的鑒定??????????????????????????．．3 33 ．8 ．5 L T B 亞單位B 細胞線性抗原表位分析?????????????????．．3 43 ．8 ．6 單克隆抗體識別的抗原表位分析????????????????????3 44 討論?????????????????????????????????????????????．．3 64 ．1 免疫

11、原的制備????????????????????????????．．3 64 ．2 雜交瘤細胞株建立與篩選????????????????????????3 64 ．3 雜交瘤細胞的克隆???????????????????????????3 74 ．4 單克隆抗體的應用???????????????????????????3 74 ．5 抗原表位的分析???????????????????????????．．3 85 結論??????