NMDA受體亞單位在生后早期大鼠SVZ中表達(dá)變化及其作用研究.pdf

1、目的:研究正常生后早期大鼠腦室下區(qū)（SVZ）中NMDA受體亞單位NR1、NR2A、NR2B 的表達(dá)變化，受體所在的細(xì)胞類(lèi)型，及NMDA受體對(duì)該區(qū)細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法:
　　 1. 取正常生后早期大鼠（postnatal day 1, P1d、P3d、P7d、P14d、P21d、P28d），行免疫組織化學(xué)染色觀察SVZ 中NMDA 受體亞單位NR1、NR2A 、NR2B的表達(dá)變化，同時(shí)觀察該區(qū)內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞（GFA

2、P+）、成熟神經(jīng)元（NeuN+）、處于增殖期的細(xì)胞（PCNA+）細(xì)胞的變化情況。
　　 2. 應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)方法，觀察SVZ 中NMDA 受體亞單位NR1 和神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物Nestin、星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP 以及處于增殖期細(xì)胞的標(biāo)記物PCNA 的區(qū)域共存及細(xì)胞共存情況。
　　 3. 取新生第三日大鼠，分別腹腔注射N(xiāo)MDA 受體激動(dòng)劑NMDA（2mg/kg/d）；
　　 選擇性非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA 受體拮抗劑

3、MK-801（10mg/kg）以及NR2B 拮抗劑Ro25-6981（40mg/kg）在P7d、P14d、P28d 行免疫組織化學(xué)染色和HE 染色，觀察三個(gè)時(shí)間點(diǎn)SVZ 中細(xì)胞增殖的變化。
　　 4. 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果統(tǒng)計(jì)：本研究細(xì)胞計(jì)數(shù)均采用高倍鏡下測(cè)量SVZ 中單位面積（0.01mm2）陽(yáng)性細(xì)胞密度表示結(jié)果，并計(jì)算相應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度占該時(shí)間點(diǎn)HE 染色下SVZ 總細(xì)胞密度的比例，以此來(lái)消除年齡變化對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較的干擾。
　

4、　 結(jié)果:
　　 1. HE 染色結(jié)果顯示，大鼠生后早期SVZ 中總的細(xì)胞數(shù)量和密度隨年齡的增加呈下降趨勢(shì)。各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞密度分別約為：P1d：227/ 0.01mm2，P3d：265/0.01mm2，P7d：167 / 0.01mm2，P14d：120 / 0.01mm2，P21d：72 / 0.01mm2，P28d：64 / 0.01mm2。
　　 2. 免疫組織化學(xué)的結(jié)果顯示在生后早期大鼠各時(shí)間點(diǎn)SVZ 中的細(xì)胞

5、上均表達(dá)有NR1、NR2A、NR2B；不同的亞單位表達(dá)呈現(xiàn)不同的變化趨勢(shì)。其中NR1 在P1d 時(shí)其陽(yáng)性細(xì)胞密度為45.50 ± 4.20 / 0.01mm2，細(xì)胞陽(yáng)性率為17％，到P14d時(shí)，其陽(yáng)性細(xì)胞密度出現(xiàn)一過(guò)性增加，達(dá)116.67 ± 14.57 / 0.01mm2，此時(shí)的陽(yáng)性細(xì)胞率也達(dá)到高峰，為97％，之后開(kāi)始下降，至P28d 時(shí)，與P1d相比，其陽(yáng)性細(xì)胞密度的差異已沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但此時(shí)，其陽(yáng)性細(xì)胞率卻遠(yuǎn)高于P1d，可達(dá)75

6、％；NR2A 和NR2B 在P1d 時(shí)其細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞密度相近，和陽(yáng)性細(xì)胞率表達(dá)均很相近，分別為104.25 ± 7.14 / 0.01mm2，（37％）和93.00 ± 17.32 / 0.01mm2（35％），以后二者的陽(yáng)性細(xì)胞密度和陽(yáng)性細(xì)胞率均呈不同變化趨勢(shì)，NR2A 陽(yáng)性細(xì)胞密度隨年齡的增長(zhǎng)逐漸下降，到P28d 時(shí)降至36.00 ± 1.64 / 0.01mm2，其陽(yáng)性細(xì)胞率在P14d 達(dá)到峰值（61％），之后，開(kāi)始緩慢下降，P2

7、8d 時(shí)，仍遠(yuǎn)高于P1d（56％）。NR2B 的陽(yáng)性細(xì)胞密度在7 天時(shí)達(dá)到高峰，為121.00 ± 15.56 / 0.01mm2，之后開(kāi)始下降，到P28d時(shí)為63.33 ± 6.03/ 0.01mm2，和P1d 相比，有明顯降低，其陽(yáng)性細(xì)胞密度卻呈持續(xù)緩慢增高的趨勢(shì)，到P28d 時(shí)可高達(dá)90％以上。
　　 3. SVZ 中的增殖細(xì)胞（PCNA+）在P1d 時(shí)，其陽(yáng)性細(xì)胞密度可達(dá)99.60 ± 9.15 /0.01mm2，隨著年

8、齡的增加，陽(yáng)性細(xì)胞密度明顯降低，到P28d 時(shí)為29.20 ± 5.02/ 0.01mm2。陽(yáng)性細(xì)胞率變化保持在37％到51％之間。
　　 4. 星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP 在出生24 小時(shí)內(nèi)的大鼠SVZ 區(qū)表達(dá)量非常低，P1d 時(shí)SVZ 區(qū)幾乎看不到陽(yáng)性反應(yīng)，以后逐漸增高，P28d 時(shí)幾乎占據(jù)整個(gè)SVZ 區(qū)。大鼠生后早期SVZ 區(qū)中幾乎無(wú)NeuN+的細(xì)胞。
　　 5. 免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示，在SVZ 中觀察到NR1 和

9、Nestin 免疫熒光雙標(biāo)細(xì)胞和NR1 和PCNA 免疫熒光雙標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞；P1d 到P7d 時(shí)，NR1 和GFAP 的區(qū)域共存程度非常低；到了P14d 以后，二者在該區(qū)區(qū)域共存程度增加。
　　 6. 給予NMDA 受體激動(dòng)劑NMDA（2mg/kg/d），在P7d 時(shí)，SVZ 細(xì)胞密度明顯增加；P14d 時(shí)PCNA+細(xì)胞密度明顯增加。分別給予MK-801（10mg/kg）和Ro25-6981（40mg/kg），P7d 時(shí)PCNA

10、 陽(yáng)性細(xì)胞密度均顯著降低，從P14d 以后逐漸升高。到P28d 時(shí)明顯高于正常，其中Ro25-6981 組升高的更明顯。
　　 結(jié)論:大鼠生后早期SVZ 中的細(xì)胞表達(dá)有NMDA 受體亞單位NR1、NR2A、NR2B，隨著年齡的增長(zhǎng)，不同的亞單位表達(dá)呈現(xiàn)不同的變化趨勢(shì)，其中部分細(xì)胞具有增殖特性。激活NMDA 受體后對(duì)SVZ 中細(xì)胞的增殖有正性調(diào)節(jié)作用，提示SVZ 區(qū)內(nèi)的NMDA 受體具有功能活性，可以參與調(diào)節(jié)生后早期SVZ 區(qū)的神