NMDA受體亞單位1在缺血大鼠腦SVZ神經干細胞上超微分布的研究.pdf

1、目的：研究NMDA受體亞單位1(N-methyl-D-aspartate receptor subunit1，NR1)在缺血大鼠腦室下區(qū)(subventricularzone，SVZ)神經干細胞上的超微分布及表達變化，為NMDA受體亞單位1參與缺血再灌注損傷引起的神經干細胞的增殖提供形態(tài)學方面的依據。
　　方法：健康成年SD大鼠，體重220-250 g，隨機分為正常組、假手術組及腦缺血再灌注組，線栓法制作大腦中動脈栓塞(Middl

2、e cerebral artery occlusion，MCAO)2小時再灌注模型，術后分1、3、7、14天4個時間點取腦，之后對正常組、假手術組及MCAO組大鼠分別進行灌注固定，做150μm振動切片，取含SVZ腦片，經梯度蔗糖浸泡，液氮凍融處理后，室溫下兔血清封閉；分別通過Nestin免疫組織化學法標記神經干細胞和免疫金一銀標記顯示NR1，光鏡下拍照。之后取Nestin標記陽性細胞腦片行免疫金一銀標記顯示NR1，光鏡下拍照。分別取Ne

3、stin、NR1及Nestin/NR1雙標記的腦片的陽性部位，大小約1 mm3，經系列脫水，置換，國產618樹脂浸潤，包埋，聚合，修塊，做70 nm超薄切片，經醋酸鈾、枸櫞酸鉛雙重染色，透射電鏡觀察、拍照。
　　用Image Pro圖像處理與分析系統(tǒng)進行光鏡下圖像分析。電鏡組每組選取5張圖片，每張圖片選擇相同的面積進行NR1計數。
　　結果：采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件分析，數據以X±s表示，組間比較采用單因素方差分析，多個

4、實驗組之間比較采用最小顯著差法(LSD)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果1.光鏡下可見，各組大鼠SVZ均可見NR1陽性細胞，假手術組陽性細胞IOD值與正常組比較差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。MCAO-組大鼠NR1的IOD值在缺血后1d開始增加，7d達到高峰，14d恢復至3d水平；同樣我們可以發(fā)現(xiàn)Nestin免疫組化染色結果中各組大鼠SVZ均可見Nestin陽性細胞，假手術組陽性細胞IOD值與正常組比較差異沒有統(tǒng)

5、計學意義(P>0.05)。MCAO-組大鼠Nestin的IOD值在缺血后3d開始增加，7d達到高峰，14d恢復至3d水平；Nestin/NR1免疫組化染色結果可見各組大鼠SVZ均有Nestin/NR1陽性細胞，假手術組陽性細胞IOD值與正常組比較差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。MCAO-組大鼠Nestin/NR1的IOD值在缺血后1d開始增加，7d達到高峰，14d恢復至3d水平；2.電鏡下可見NR1在缺血大鼠腦SVZ超微分布：通過透

6、射電鏡觀察，大鼠腦SVZ Nestin免疫反應陽性產物呈黑色絮狀電子致密物，分布于Nestin免疫反應陽性細胞的胞漿內；NR1免疫反應陽性產物呈黑色顆粒狀，分布于SVZ各型細胞的胞膜、胞漿以及高爾基體和粗面內質網；神經干細胞內可見NR1免疫金顆粒與Nestin免疫組化產物共存。陰性對照樣本未見任何標記。與正常組及假手術組比較可見腦缺血后SVZ神經干細胞上胞漿內NR1的顯著增多，且NR1表達在1天開始增加，7天達高峰(P<0.05)；此時