受體相互作用蛋白3在大鼠急性高眼壓視網膜神經節(jié)細胞中表達變化的初步研究.pdf

1、目的:研究受體相互作用蛋白3(Receptor Interacting Protein3，RIP3)在正常大鼠視網膜中的分布以及急性眼高壓早期大鼠視網膜RIP3表達的時空變化，初步探討急性高眼壓早期導致視網膜節(jié)細胞損傷的可能分子機制。
　　 方法:(1)隨機挑選6只健康的成年Sprague-Dawley大鼠，3只活取視網膜組織勻漿后進行免疫蛋白印跡法檢驗抗體特異性，3只灌注取材之后冰凍切片進行抗體吸收實驗和免疫組織化學染色以及R

2、IP3與Neuron-specifc nuclear antigen(NeuN，神經節(jié)細胞標志物)、Calbindin(CB，水平細胞標志物)、Glial fibrillary acidic protein(GFAP,星形膠質細胞標志物)、Glutamine synthetase(GS，Müller細胞標志物)、Protein kinase C alpha(PKC-α，雙極細胞標志物)、Parvalbumin(PV，無長突細胞標志物)、

3、Rhodopsin(視細胞標志物)、Synaptophysin(突觸標志物)、Integrin，alpha M(CD11b，小膠質細胞標志物)免疫熒光組織化學雙標染色，分析RIP3在正常成年大鼠視網膜不同細胞類型中的表達分布;(2)挑選18只健康的成年Sprague-Dawley大鼠按照存活時間隨機分為6小時、12小時、24小時三個組，每組6只。一側眼球進行加壓處理、另一側眼球作為自體對照，不作任何處理。高眼壓側眼球在眼前房插針加壓，維

4、持壓力至110毫米汞柱1小時，下架存活至相對應的時間點后，每個小組隨機取3只大鼠注射過量的麻藥后冰上快速剝離視網膜組織，免疫蛋白印跡法分析RIP3的表達量。每組另外3只大鼠灌注取材用免疫熒光染色分析RIP3在視網膜中的表達變化。
　　 結果:1.RIP3在正常成年大鼠視網膜中的免疫組織化學染色顯示:神經纖維層和節(jié)細胞層染色最強，內核層染色強度較弱可見顆粒狀細胞形態(tài)，內網層染色強度最弱，在外網層邊緣部分可見少量染色較淺的RIP3陽

5、性細胞分布，外網層未見明顯陽性細胞染色，染色強度較弱;2.免疫熒光組織化學雙標染色顯示:在節(jié)細胞層，RIP3的陽性產物與NeuN陽性產物存在明顯雙標;在內核層靠近內網層邊緣部分與部分PV陽性產物存在明顯雙標;在內核層靠近外網層邊緣部分與部分CB陽性產物存在明顯雙標，此外，RIP3與PKC-α，GS陽性產物，GFAP陽性產物以及CD11b陽性產物呈現(xiàn)微弱的雙標;3.在急性高眼壓處理以后，Western blot顯示RIP3表達明顯增強，表

6、現(xiàn)為6小時、12小時的條帶明顯增粗，24小時條帶較12小時弱;免疫熒光染色顯示:急性高眼壓損傷后，損傷組與正常對照組相比RIP3陽性染色分布未見明顯變化，節(jié)細胞層的RIP3陽性染色明顯較對照組強，其中12小時染色最強，6小時和24小時的染色強度較空白對照組有所增強，但較12小時染色弱。
　　 結論:RIP3主要分布于視網膜節(jié)細胞，并在部分無長突細胞和水平細胞以及膠質細胞內表達，而在其他類型的視網膜細胞未見明顯表達。急性高眼壓早期