眼內注射雷帕霉素促急性高眼壓大鼠視網膜神經節(jié)細胞存活的機制.pdf

1、目的：探索雷帕霉素促急性高眼壓大鼠視網膜神經節(jié)細胞存活的作用機制。
　　方法：采用健康成年Fischer344大鼠，8-12周齡，共36只。前房灌注生理鹽水法建立急性高眼壓動物模型，于術中維持75mmHg眼壓2小時。分別設組如下：正常眼組、對照組（DMSO）、雷帕霉素組、腦源性神經營養(yǎng)因子（Brain-Derived Neurotrophic Factor BDNF）組、BDNF聯合雷帕霉素組，分別于急性高眼壓3天后玻璃體腔注射相

2、關藥物，6h后取各組視網膜組織進行western blot。分別探測 p70S6K、pAKT(ser473)、pERK、PTEN四個靶蛋白，其中p70S6K是雷帕霉素發(fā)揮抑制mTORC1藥理作用的觀察指標，pAKT(ser473)、pERK蛋白是pS6K-IRS1-PI3K-pERK這一負反饋通路的觀察指標。最后通過對可能發(fā)生變化的靶蛋白pERK、PTEN進行抑制或激活，取視網膜組織進行鋪片免疫組化再次評估視網膜神經節(jié)細胞的數目，進一步

3、確認相關作用機制。數據分析多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Bonferroni檢驗。抑制pERK后兩樣本比較采用獨立樣本T檢驗。
　　結果：（1）急性高眼壓誘導后，與正常眼相比，p70S6K蛋白含量下降（**p<0.01），而眼內注射雷帕霉素以及聯合藥物后與對照組（DMSO）比較p70S6K蛋白含量明顯減少（**p<0.01），即雷帕霉素可抑制mTORC1活性。（2）急性高眼壓誘導并注射相關藥物后，雷帕霉素組和聯合用藥組

4、可提高pAKT(ser473)蛋白含量（*p<0.05），BDNF組pAKT(ser473)蛋白也增加。p70s6k、pAKT(ser473)的變化同時反映p70S6K-IRS1-PI3K負反饋信號通路減弱。（3）雷帕霉素組和聯合用藥組可顯著增加pERK蛋白的活性（**p<0.01）。（4）通過進一步抑制pERK(U0126)，我們發(fā)現U0126可明顯減少雷帕霉素促視網膜神經節(jié)細胞存活的作用（雷帕霉素+U0126組細胞數841±56/m