?；撬釋?duì)大鼠急性高眼壓視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用及其對(duì)RhoA-ROCK-2信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、第一部分：
　　 目的：觀察急性高眼壓損傷后RhoA、Rho 相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶-2（ROCK-2）和內(nèi)皮素（ET-1）在大鼠視網(wǎng)膜中的分布、表達(dá)及其相關(guān)性。
　　 方法：30只SD 大鼠隨機(jī)分為正常組（N組）、急性高眼壓后1d組（H1組）、3d組（H3組）、5d組（H5組）和7d組（H7組），制作急性高眼壓模型后，用免疫組織化學(xué)法觀察各組RhoA、ROCK-2和ET-1在視網(wǎng)膜中的分布、平均吸光度（OD）及其相關(guān)

2、性，Western blotting 法觀察各組RhoA和ROCK-2在視網(wǎng)膜中的蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果：N組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層（GCL）中僅見散在幾個(gè)RGCs中表達(dá)RhoA、ROCK-2或ET-1，其余各層均未見相應(yīng)的陽性染色；損傷組視網(wǎng)膜中RhoA、ROCK-2或ET-1的分布范圍隨損傷時(shí)間的延長而擴(kuò)大，其OD 值均高于相應(yīng)N組，其中ET-1表達(dá)量分別與RhoA或ROCK-2表達(dá)量呈顯著正相關(guān)；H1、H3、H5、H7組視網(wǎng)膜中R

3、hoA或ROCK-2 蛋白表達(dá)均高于N組，并隨時(shí)間的延長顯著增加，兩兩之間比較均有顯著性差異。
　　 結(jié)論：急性高眼壓損傷可以激活視網(wǎng)膜中RhoA/ROCK-2 通路，使RhoA或ROCK-2分布范圍變廣、表達(dá)增加，7天時(shí)最顯著；也可以使ET-1表達(dá)增加；ET-1與RhoA或ROCK-2 之間有顯著正相關(guān)。RhoA/ROCK-2 通路的激活在大鼠急性高眼壓后視網(wǎng)膜損傷中起著重要作用。
　　 第二部分：
　　 目的

4、：觀察不同劑量?；撬釋?duì)大鼠急性高眼壓模型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用，并探求最佳用藥劑量。
　　 方法：將30只成年雌性SD 大鼠隨機(jī)分成5組：正常組（N組）、模型組（M組）、模型＋牛磺酸低劑量組（TL組）、模型＋?；撬嶂袆┝拷M（TM組）、模型＋牛磺酸高劑量組（TH組），正常組不做任何處理，后四組制作急性高眼壓模型：雙眼前房灌注生理鹽水，并將鹽水瓶升至150cm 高度產(chǎn)生110mmHg的眼內(nèi)壓力，持續(xù)60min,其中后三組于造模前

5、一周、當(dāng)天及其后每天分別腹腔注射牛磺酸5，15，25mg/kg q.d，各組于造模后7天進(jìn)行雙眼圖形視覺誘發(fā)電位檢查評(píng)價(jià)視功能，之后立即取雙眼眼球，HE 染色法定量觀察視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度反映視網(wǎng)膜損害情況，TUNEL 法測定RGCs 凋亡指數(shù)（AI）反映RGCs 凋亡情況。采用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，各指標(biāo)組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用成組資料t 檢驗(yàn)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：急性高眼壓后M組和TL組較之N組視網(wǎng)膜內(nèi)層厚

6、度顯著變薄、PVEP的潛伏期顯著延遲、振幅顯著降低，TM組和TH組較之N組視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度亦顯著變薄、PVEP的潛伏期顯著延遲、振幅顯著降低，TL、TM 及TH組與M組比較視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度顯著增厚、RGCs AI 顯著降低、PVEP的潛伏期顯著縮短、振幅顯著升高，而TH 各指標(biāo)顯著優(yōu)于TM組和TL組。
　　 結(jié)論：急性高眼壓損傷后可以引起視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度變薄、RGCs 凋亡和PVEP 潛伏期延遲、振幅降低，牛磺酸可以減輕上述變化，且呈

7、劑量依賴性。?；撬嶙罴阎委焺┝渴歉骨蛔⑸?5mg/kg q.d。
　　 第三部分：
　　 目的：研究牛磺酸對(duì)大鼠急性高眼壓模型中視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)作用及其對(duì)RhoA、Rho 激酶2（ROCK-2）及內(nèi)皮素-1(ET-1)表達(dá)的影響。
　　 方法：24只SD 大鼠被隨機(jī)分為正常組（N組）、模型組（M組）、模型＋磷酸緩沖液組（MP組）、模型＋牛磺酸組（T組），N組不做任何處理，后三組制作急性高眼壓模型：雙眼前房灌注

8、生理鹽水，并將鹽水瓶升至150cm 高度產(chǎn)生110mmHg的眼內(nèi)壓，持續(xù)60min，其中MP和T組于造模前一周、當(dāng)天及其后每天分別給予腹腔注射無菌磷酸緩沖液（PBS）25mg/kg q.d和?；撬?5mg/kg q.d，各組于造模后7天取雙眼眼球及心臟血，TUNEL 法觀察RGCs 凋亡指數(shù)（AI），免疫組織化學(xué)法觀察各組視網(wǎng)膜中RhoA、ROCK-2 及ET-1的分布、并用平均吸光度值（OD）反映各自表達(dá)量，Western blott

9、ing 法測定各組視網(wǎng)膜中RhoA、ROCK-2的蛋白表達(dá)，放射免疫法測定血漿中ET-1 含量，血液流變儀測量不同剪變率下的全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)（BCAI）和紅細(xì)胞壓積（HCT）。采用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，各指標(biāo)組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用成組資料t 檢驗(yàn)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：M組和MP組視網(wǎng)膜中RhoA（P<0.01）、ROCK-2（P<0.01）、ET-1（P<0.01）的OD 值、視網(wǎng)膜RhoA（P

10、<0.01）、ROCK-2（P<0.01）蛋白表達(dá)量、血漿ET-1 含量(P<0.05)、低、中、高切全血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)（BCAI）(P<0.05)和紅細(xì)胞壓積(P<0.05)均顯著高于N組，而M組與MP組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，T組中視網(wǎng)膜RhoA、ROCK-2、ET-1的OD 值、視網(wǎng)膜RhoA、ROCK-2蛋白表達(dá)量、血漿ET-1 含量及血黏度各指標(biāo)均顯著低于M或MP組，并且T組RGCs AI 明顯低于M或MP組。