利魯唑?qū)毙愿哐蹓褐麓笫笠暰W(wǎng)膜損傷的保護作用.pdf

1、研究背景和目的：
　　青光眼（Glaucoma）是指一系列與眼內(nèi)壓相關(guān)的、以視神經(jīng)特征性損傷為共同特征的一組眼病。對于青光眼的發(fā)病機制，學(xué)術(shù)界未達成一致結(jié)論，很多研究表明[4-6]眼壓升高，可能引起原發(fā)性開角型青光眼患者玻璃體中谷氨酸濃度升高，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞凋亡。Caspase-3是細胞凋亡蛋白酶級聯(lián)反應(yīng)的關(guān)鍵，測定組織內(nèi)的Caspase-3的表達水平可以在某種程度上反應(yīng)該組織的凋亡狀態(tài)。苯并噻唑類藥物利魯唑是一種抗谷氨

2、酸藥物，國外許多學(xué)者從整體、離體、分子水平探討了利魯唑的作用機制，及其在麻醉、神經(jīng)保護、抗驚厥、抗抑郁、鎮(zhèn)痛和抗依賴等方面的藥理作用。該藥最早作為谷氨酸拮抗劑廣泛用于肌萎縮側(cè)索硬化患者的治療，后又有研究發(fā)現(xiàn)利魯唑在穩(wěn)定細胞內(nèi)外離子（鈉、鉀、鈣）濃度有一定療效。國外有文獻報道利魯唑可以縮短急性高眼壓大鼠視網(wǎng)膜b波恢復(fù)時間[1]；國內(nèi)已開展利用利魯唑治療視網(wǎng)膜血管異常增生[3]。因此本研究利用前房灌注升高眼壓的方法制作大鼠急性高眼壓模型，給

3、予利魯唑干預(yù)，通過檢測Caspase-3表達水平及凋亡細胞，進而了解利魯唑在急性高眼壓視網(wǎng)膜損傷中的作用，為急性高眼壓視神經(jīng)保護提供藥物治療的依據(jù)。
　　材料與方法：
　　以前房灌注的方法制作大鼠急性高眼壓模型80例，高眼壓對照組40例、利魯唑干預(yù)組40例以及正常對照組40例，造模成功后于再灌注12h、24h、48h及72h處死大鼠，摘取眼球。HE染色觀察各時間點各組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)改變情況，采用免疫組織化學(xué)染色方法觀察Cas

4、pase-3在大鼠視網(wǎng)膜組織中的表達，運用
　　TUNEL法檢測視網(wǎng)膜細胞凋亡。運用SPSS17.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果均用x± s表示，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色：正常大鼠視網(wǎng)膜層次結(jié)構(gòu)清晰，各層細胞排列整齊。高眼壓對照組大鼠視網(wǎng)膜水腫明顯，出現(xiàn)炎性細胞，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)不清晰；利魯唑干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜水腫較高眼壓對照組輕，炎性細胞較少，結(jié)構(gòu)相對完整。
　　2.免疫組化

5、　　2.1正常對照組大鼠：視網(wǎng)膜Caspase-3表達微弱，不同時間點，Caspase-3陽性細胞數(shù)在同一水平波動，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.2高眼壓對照組及利魯唑干預(yù)組大鼠：視網(wǎng)膜Caspase-3表達均隨再灌注時間而變化，表現(xiàn)為先升高、后減低，再灌注24h時，Caspase-3陽性細胞數(shù)最多；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，再灌注不同時間間Caspase-3陽性細胞數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.3利魯唑干預(yù)效果分析：對三組大鼠各再

6、灌注時間點視網(wǎng)膜Caspase-3陽性細胞數(shù)行單因素方差分析F12h=67.851 P＜0.01、F24h=112.187 P＜0.01、F48h=39.640 P＜0.01、F72h=15.033 P＜0.01。經(jīng)LSD法兩兩比較示，再灌注各時間點，利魯唑干預(yù)組大鼠Caspase-3陽性細胞數(shù)均較高眼壓對照組減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.TUNEL染色
　　3.1正常對照組大鼠：凋亡細胞少見。不同時間點，凋亡細胞數(shù)在同

7、一水平波動，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.2高眼壓對照組及利魯唑干預(yù)組大鼠：視網(wǎng)膜凋亡細胞數(shù)均隨再灌注時間而變化，表現(xiàn)為先升高、后減低，再灌注24h時，數(shù)值達到最大水平；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，再灌注不同時間間凋亡細胞數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.3利魯唑干預(yù)效果分析：對三組大鼠各再灌注時間點凋亡細胞數(shù)行單因素方差分析F12h=93.888 P＜0.01、F24h=396.437 P＜0.01、F48h=482.622 P＜0.0